地牡寧神口服液是由熟地黃、枸杞子、山茱萸等11味中藥組成，地牡寧神口服液具有滋補肝腎，寧神益智的作用。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是采用薄層掃描法測定知母中的拔葜皂苷元的含量，因薄層掃描法專屬性、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性均較差，故我們對其方法進(jìn)行了改進(jìn)。山茱萸具有補益肝腎的作用，其中化學(xué)成分馬錢苷有增強免疫的作用，與地牡寧神口服液的功能主治相吻合，因此我們采用高效液相色譜法測定地牡寧神口服液中馬錢苷的含量，作為控制地牡寧神口服液的質(zhì)量指標(biāo)。

 
1 儀器與試藥 
    LC-10ATvp高效液相色譜儀（日本島津，SPD-10Avp紫外檢測器，CLASS—VP色譜工作站），uV-2501型紫外分光光度計（日本島津），離心機（Abbott Laboratories，德國），SD-350H型超聲波清洗器（韓國）。馬錢苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：111640—200401），地牡寧神口服液為市售樣品（山東煙臺西苑制藥廠生產(chǎn)），甲醇為色譜純（天津市四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司，20040426101），甲酸為分析級（江蘇益林化工廠，980904），水為純化水。

 
2 方法與結(jié)果 
    2.1 色譜條件 
    色譜柱：SHIMADZU Shim-pack vp-ODS（250 mm×4.6mm，5um），預(yù)柱：SHIMADZU Shim-pack vp-ODS（10 mm×4.6 mm，5u m）；流動相：甲醇-水-甲酸（30：69：1），檢測波長：240 nm，柱溫：30℃ ，流速：1.0 ml•min～，進(jìn)樣量20 ul。

 
    2.2 溶液的制備 
    2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取馬錢苷對照品適量，用50％ 甲醇溶解并稀釋配制成30ug•ml-1的對照品溶液。 
    2.2.2 供試品溶液的制備 取市售樣品地牡寧神口服液（批號：20041201）3支（10 ml/支），混勻，精密量取10.0 ml置具塞錐形瓶中蒸干，放冷，精密加入50％ 甲醇25 ml，密塞，稱定重量，超聲15 min，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用50％ 甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液10 ml，置中性氧化鋁柱（100～200目，4 g，內(nèi)徑1 cm，干法裝柱）上，用40％ 甲醇50 ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加50％ 甲醇適量使溶解，并轉(zhuǎn)移至10 ml量瓶中，加50％ 甲醇稀釋至刻度，搖勻，過濾，即得。

 
    2.2.3 陰性樣品溶液的制備取地牡寧神口服液（不含山茱萸）10 ml，置具塞錐形瓶中蒸干，按“2.2.2”供試品溶液的制備方法制備陰性樣品溶液。

 
    2.3 專屬性考察 
    在“2.1”色譜條件下，分別吸取陰性樣品溶液、對照品溶液和供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。可見在與馬錢苷對照品峰相應(yīng)的位置上，供試品溶液圖中有相應(yīng)的色譜峰，而在陰性樣品溶液色譜圖中相應(yīng)保留時間處無此峰，理論板數(shù)按馬錢苷峰計算應(yīng)不低于3 000。見圖1（略）。 
 
    2.4 線性關(guān)系的考察 
    精密稱取馬錢苷對照品適量，加50％甲醇使完全溶解，配制成0.256 mg•ml 的對照品溶液。再加50％ 甲醇配制成0.128，0.064，0.032，0.016，0.008 mg•ml 的對照品溶液。精密吸取各濃度的對照品溶液20ul，注入液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積積分值Y為縱坐標(biāo)，馬錢苷對照品的進(jìn)樣量x為橫坐標(biāo)，經(jīng)線性回歸，回歸方程Y=1.66×10^6X+1.13×10^5，r=0.999 8（n=6），表明馬錢苷進(jìn)樣量在0.16～2.56 g范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

 
    2.5 精密度試驗 
    取同一濃度的對照品溶液（0.032 mg•ml），連續(xù)進(jìn)樣5次，進(jìn)樣量20ul，計算峰面積的RSD％ =1.3（n=5），結(jié)果表明精密度良好。

 
    2.6 重復(fù)性試驗 
    取同一批號地牡寧神口服液樣品（批號：040528）5份，按照供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，測定每份的含量，RSD 1.2％（n=5），結(jié)果表明重復(fù)性良好。

  
    2.7 穩(wěn)定性試驗 
    取同一批號地牡寧神口服液供試品溶液（批號：040528），分別在0，2，4，6，8，12 h進(jìn)樣測定馬錢苷峰面積，RSD=1.5％（n=6）。結(jié)果表明制備的供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

 
    2.8 加樣回收率試驗 
    精密量取已知含量同一批號地牡寧神口服液的樣品（批號~040528，馬錢苷含量1.87 m 支）5份，各2.0 ml，分別精密加入馬錢苷對照品0.30 mg，按供試品溶液的制備方法制備供試液，進(jìn)樣20ul按上述色譜條件測定，計算馬錢苷回收率，結(jié)果見表1（略） 
  
    2.9 樣品含量測定（n=3） 
    取市售樣品地牡寧神口服液（批號：20050526、20050608、20050620）三個批號各3支（10 ml/支），分別混勻，各精密量取10 mll，分別置錐形瓶中蒸干，按照“2.2.2”項中供試品溶液制備方法制備供試品溶液，精密吸取20 l注入液相色譜儀中，每批測定3次，平均含量分別為1.76，1.85，1.81 m 支。

 
3 討論 
    3.1 質(zhì)量控制方法的改進(jìn) 
    原標(biāo)準(zhǔn)中方法為薄層掃描法測定知母中的拔葜皂苷元，因薄層掃描法專屬性、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性均較差，所以，我們采用高效液相色譜法測定地牡寧神口服液中馬錢苷的含量做為質(zhì)量控制指標(biāo)。

 
    3.1 波長的選擇 
    文獻(xiàn)中馬錢苷含量測定方法中的波長為236 am，《中國藥典））2005年版中六味地黃丸測定馬錢苷的波長為236am，《中國藥典））2005年版中山茱萸藥材含量測定中波長為240 am。我們?nèi)�對照品溶液適量在紫外可見分光光度儀中掃描，記錄譜圖，從圖中可看出，對照品溶液在240 nnl處有最大吸收，故擬定馬錢苷的紫外吸收波長為240 am。

 
    3.2 流動相的選擇 
    以甲醇.水（30：70）為流動相 ]，試驗中發(fā)現(xiàn)樣品色譜圖中馬錢苷峰峰形不佳，經(jīng)過調(diào)整流動相的比例，峰形都不佳，最后調(diào)整流動相為甲醇.水.甲酸（30：69：1）后，峰形得到改善。

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