劉亞明,牛 欣,馮前進,王世民,曹月英

( 北京中醫(yī)藥大學, 北京 100029, 1 山西中醫(yī)學院, 太原 030024,2 山西省中醫(yī)藥研究院, 太原 030012)

提 要 本文對老年小鼠灌服龜齡集0. 125g/ kg、0 . 25g/ kg 和黨參0. 5g/ kg 50 天, 測定SOD, MDA、GSH- PX、NA 和DA, 結果顯示, 龜齡集能明顯提高老年小鼠SOD 和GSH- Px 的含量, 減少MDA 含量, 龜齡集還能明顯增加老年小鼠單胺類神經(jīng)遞質的含量,表明龜齡集有抗衰老作用。 

關鍵詞 龜齡集; 抗氧化; NE; DA

龜齡集有增強小鼠免疫功能, 促進性激素、腎上腺皮質激素合成, 促進小鼠RNA、蛋白質合成, 增加心血排出量, 抗疲勞、抗缺氧和保肝等作用。我們發(fā)現(xiàn)龜齡集有顯著的抗脂質過氧化作用, 為了進一步觀察龜齡集的抗衰老作用及機理, 本文對老年小鼠中樞神經(jīng)遞質去甲腎上腺素( NE) 、多巴胺( DA)及SOD、GSH- Px、MDA 含量進行了測定, 現(xiàn)將結果報道如下。

1 材料

1. 1 試驗藥物龜齡集散劑, 山西中藥廠產(chǎn), 批號990713。

1. 2 動物 昆明種小鼠, 體重33 ? 2g , 雌雄各半, 由山西省中醫(yī)藥研究院實驗動物中心提供。

1. 3 試劑 去甲腎上腺素( NB) 重酒石酸鹽( 中國藥品生物制品檢定所, 批號9402) ; 多巴胺( DA) 鹽酸鹽( 中國藥品生物制品檢定所, 批號9404) ; SOD 試劑盒、MDA 試劑盒、GSH- Px 試劑盒( 均購自南京建成生物工程研究所, 批號990828) 。

1. 4 儀器 高效液相色譜儀LC- 10Avp 系列( 日本島津) , LECD-6A 電化學檢測器。

1. 5 方法

1. 5. 1 標準液配制 取去甲腎上腺素( NE) 、多巴胺( DA) 標準液分別配成濃度為1g / L 的標準液, 貯存于- 20 e 冰箱內, 分析時配成濃度為0. 1mg/ L 的應試液。

1. 5. 2 色譜測定條件 熒光檢測激發(fā)波長設置為280nm, 發(fā)射波長設置為315nm, 室溫保持在25e 左右, 以峰面積定量計算。并建立標準品的分離色譜圖及NE、DA 工作曲線及線性方程式。

1. 5. 3 分組與測定 將老年小鼠( 3 月齡) 50 只, 隨機分5 組:即老齡組, 龜齡集小、中劑量組和黨參組。另取10 只( 1. 5 月齡) 小鼠為對照組。小鼠每日灌服蒸溜水或藥物飼養(yǎng)50d。處死小鼠取血分離血清參照文獻[ 3] 方法分別進行小鼠MDA、SOD及GSH- Px 含量測定。另將動物斷頭置于冰臺上, 迅速取出腦組織并快速保存于液氮中備測。另將小鼠全腦( 除去小腦) 稱重后, 放入含0. 5mol/ L EDTA、0. 01% 半胱氨酸的0. 4mmol/ LHClO4 冷溶液中勻漿, 于4e 10000g 離心10mmin。取上清液與1/ 2 體積的鉀鹽溶液混合, 冰溶液中靜置10min。進樣前用0.45Lm 的濾膜過濾, 10000g 高速離心10min, 取上清液20Ll 測定NE、DA 含量。

2 結果

龜齡集對老年小鼠血清中MDA、SOD 及GSH- Px 含量的影響見表1。

3 討論

脂質過氧化是指機體代謝產(chǎn)生的自由基誘導生物膜中不飽和脂肪酸發(fā)生氧化反應, 形成過氧化產(chǎn)物MDA。衰老可使細胞膜磷脂分子產(chǎn)生脂質過氧化。MDA 能使膜蛋白、酶發(fā)生交聯(lián)反應, 使膜通透性增加, 導致細胞膜結構、功能和代謝發(fā)生改變,對機體造成損害。血清MDA 含量多少能反映細胞膜脂質過氧化的強弱, 龜齡集能明顯抑制衰老動物血清MDA 生成和明顯。

降低衰老小鼠血清MDA 含量, 表明具有抗脂質過氧化作用。另外已知自由基( 超氧離子自由基和羥自由基) 是啟動脂質過氧化的關鍵因素, GSH- Px 作為一種抗氧化與抗自由基物質, 其含量越下降細胞衰老程度就越嚴重。SOD 是超氧陰離子自由基的清除劑, 可抑制自由基啟動的脂質過氧化反應。龜齡集可明顯提高衰老小鼠血清SOD 含量及GSH- Px 含量, 這一結果與我們以往的報告相似[ 3] , 表明龜齡集具有顯著的抗脂質過氧化作用。

一般認為NE 和DA 的合成是腎上腺素能神經(jīng)元攝取血中的酪氨酸為原料, 在胞漿內首先羥化成多巴, 再脫羥生成多巴胺, 然后進入囊泡, 經(jīng)B- 羥化而生成NE。當腦內NE、DA 含量下降時則表明腦功能衰退。同時由于衰老動物的消化功能減退而使DA、NE 的前體物質攝入減少, 則往往伴隨有酪氨酸羥化酶活性或多巴胺脫羥酸活性降低, 表現(xiàn)為老齡小鼠腦內的NE、DA 含量下降。本實驗結果表明龜齡集有明顯提高NE、DA 含量, 提示其有顯著的抗衰老作用。有報道龜齡集有防止大鼠小腦皮質突觸素丟失的作用, 這與我們的研究結果基本一致。至于其作用機致是增加NE、DA 單胺遞質的重攝取, 還是影響遞質合成酶或分解酶的活性, 則有待進一步研究。

TAG：龜齡集 龜齡集作用 龜齡集效果