【摘要】目的 通過比較幾種檢測淋病奈瑟菌的方法，評價其在臨床診斷中的應用價值。方法 收集我院2009年10月~2010年12月431例疑似淋病奈瑟菌感染患者標本，分別做直接涂片染色、培養鑒定、聚合酶鏈反應(PCR)、斑點金免疫滲濾(dot immunogold filtration assay，DIGFA)4種檢測，以培養鑒定為對照評價各方法的臨床應用價值。結果 直接涂片染色法陽性檢出率低于其他三種方法(P＜0.05)，斑點金免疫滲濾法與培養鑒定兩種檢測方法陽性檢出率比較差異無統計學意義(P＞0.05)。PCR檢測法陽性檢出率高于其他三種方法(P＜0.05)。結論 在臨床微生物診斷工作中建議選擇至少兩種檢測方法同時檢測淋病奈瑟茵以提高陽性檢出率。

【關鍵詞】淋病奈瑟茵；直接涂片染色；培養鑒定；聚合酶鏈反應；斑點金免疫滲濾法

 

淋病是最常見的性傳播疾病之一，其病原體為淋病奈瑟菌(簡稱淋球菌，Neisseria Gonorrhoeae，NG)。淋球菌的診斷主要依靠實驗室檢查.當前實驗室檢測淋球菌的方法較多，常用的方法有直接涂片染色法(Gram Stained Direct Smears，GSDS)、培養鑒定法(Culture and Identification，CI)、聚合酶鏈反應法(Polymerase Chain Reaction，PCR)、斑點金免疫滲濾法(Dot Immunogold Filtration Assay，DIGFA)，各檢測方法結果不一致時有發生。本文以培養鑒定法為對照，對四種淋球菌檢測方法作比較和評價.現報道如下。

 

1 對象與方法

1.1 研究對象

收集2009年l0月~20l0年12月于我院婦科和皮膚科就診的疑似淋球菌感染患者431例，其中女性226例，男性205例。

 

1.2 標本采集

由門診醫生進行取材.男性患者采用尿道口膿性分泌物或一次性拭子插入尿道內2~3cm處取分泌物。女性患者則以一次性拭子插人宮頸口0.5~1cm處取分泌物黏液。將上述取得的分泌物置于4支無菌管中，保溫并及時送檢。

 

1.3 主要儀器與試劑

淋球菌培養基購于杭州怡藍生物有限公司.鑒定采用法國梅里埃VITEK 2 compact全自動細菌鑒定儀及其配套的原裝試劑。PCR檢測儀器為LightCycler，所用試劑購自廣州中山達安試劑有限公司，DIGFA法所用試劑購于藍波生物技術有限公司。

 

1.4 檢測方法

①直接涂片染色法：按照全國臨床檢驗操作規程進行；②培養鑒定法：取分泌物直接連續劃線接種于TM淋球菌專用培養基(培養基使用前應預溫于35℃恒溫內)，放置于5%CO₂培養箱內培養24~48h。③PCR和DIGFA法：嚴格按各試劑說明書操作。

 

1.5 統計學分析

采用SPSS 11.5統計軟件，各檢測方法淋球菌陽性檢出率的比較采用4×2卡方檢驗，兩種方法的一致性檢驗采用Kappa分析。檢驗水準取α=0.05。

 

2 結果

2.1 四種方法檢測淋球菌的陽性檢出率

431例疑似淋球菌感染患者標本分別用4種方法檢測淋球菌，GSDS法陽性檢出率最低，PCR法陽性檢出率最高(P＜0.05)，DIGFA法與CI法比較差異無統計學意義，見表1。

 

2.2 四種方法檢測淋球菌的符合度

CI法檢測陽性例數97例，其中GSDS法檢測為陰性25例，DIGFA法檢測為陰性9例。PCR法檢測為陰性1例。另外，GSDS法和DIGFA法檢測陽性3例而CI法檢測為陰性，PCR法檢測陽性9例而CI法檢測為陰性，見表2。CI法和PCR法檢測淋球菌存在一致性(K=0.886，P＜0.05)，CI法與其他兩種方法不存在一致性(P＞0.05)。

 

3 討論

目前臨床診斷淋球菌的方法有很多，本研究選取了直接涂片染色法、斑點金免疫滲濾法、培養鑒定法、聚合酶鏈反應(PCR)檢測法來進行比較。培養鑒定法被廣泛地認為是診斷淋球菌的“金標準”，本研究以培養鑒定法為對照來比較其他幾種非培養法在淋球菌診斷中的優劣。

 

研究結果表明，直接涂片染色法檢出率最低，與錢可瓊的研究結果不一致，因影響直接染色涂片法的因素有很多，如取材得當、染色效果、是否服用抗生素、檢驗人員鏡檢經驗和責任心等均可影響陽性檢出率。斑點金免疫滲濾法和培養鑒定法陽性檢出率比較差異沒有統計學意義，與劉金波等的研究結果基本一致。培養鑒定法仍為診斷淋球菌最可靠的方法，取材要求相對較高，取材不當和前期服用抗生素會導致分離培養的效果不佳。淋球菌受溫度的影響較大，標本采集后應注意保暖保濕，特別是冬天在實驗室外放置時間太久，培養鑒定法容易產生假陰性，需要及時送往實驗室接種。淋球菌生長緩慢，使得培養鑒定法無法很好地保證臨床上要求的快速確診。斑點金免疫滲濾法陽性檢出率基本上與培養鑒定法一致，能快速檢測淋球菌，對淋病的早期診斷及治療具有實用價值。PCR檢測法的檢出率最高，與胡凱的研究結果基本一致，由于影響PCR檢測法的因素較少，與培養鑒定法比較，標本采集后不受保存溫度及時間和短期內服用抗生素影響，因此其陽性檢出率較高，但檢測費用和設備要求也相對較高。由于檢測方法和原理不同，四種方法檢測淋球菌的符合度也不一致，同一標本，各檢測方法結果不一致時有發生。

 

綜上所述，直接涂片染色法作為一種快速經濟簡便的方法對淋球菌的診斷有著重要的提示作用，而斑點金免疫滲濾快速檢測法亦可作為診斷淋球菌的參考。但是對于女性患者及慢性期的患者，培養鑒定法仍然是不可缺少的。尤其是近年來，由于淋球菌的耐藥株不斷出現，多重耐藥的現象日益凸顯，分離培養之后的藥物敏感試驗就顯得尤為重要了。PCR檢測法其靈敏度高，影響因素少，但設備要求高，對于基層醫院難以開展。因此，在臨床工作中為了避免漏診誤診，建議根據實際需求至少選擇兩種方法同時檢測以提高淋球菌的陽性檢出率。

 

(周楊霄，黃芬，幾種檢測淋病奈瑟菌方法的比較研究[J]中國現代醫生2012年4月第50卷第11期：88-89)

 

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