抗栓膠囊是安徽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院院內(nèi)制劑,曾用名為通腦精膠囊,該方由大黃、川芎等4味中藥組成,功能行氣化痰、活血解毒,主要用于治療老年性中風(fēng)[1]等疾病。前期研究過程中曾對(duì)其中大黃素的含量進(jìn)行了薄層色譜法的含量測(cè)定[2]。為了建立該制劑的規(guī)范化定量分析方法,更好地控制本品質(zhì)量,本課題組對(duì)該制劑進(jìn)行了含量測(cè)定方面的提高研究。本試驗(yàn)采用高效液相色譜(HPLC)法對(duì)其君藥大黃中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素、大黃素甲醚5種成分的含量同時(shí)進(jìn)行測(cè)定。現(xiàn)報(bào)道如下。

　　1 儀器與試藥

　　WATERS高效液相色譜儀(600泵,2487檢測(cè)器,Millennium32工作站),BP211D電子天平(德國(guó)塞多利斯公司),HH-S型水浴鍋(鞏義市英峪予華儀器廠),500 mL調(diào)溫電熱套(上海浦東新區(qū)電理儀器廠),SK3200H超聲清洗器(上海科導(dǎo)儀器有限公司)。

　　抗栓膠囊含量測(cè)定用對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)分別為：蘆薈大黃素0795-200605,大黃酸0757-200005,大黃酚0796-2002081,大黃素0756-200110,大黃素甲醚0758-200610。甲醇為色譜純;水為二次重蒸水;其他試劑均為分析純。

　　2 方法與結(jié)果

　　2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

　　色譜柱：Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5 ?m);柱溫：25 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm;流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸(85∶15);流速：1.0 mL/min;進(jìn)樣量20 /L。理論板數(shù)以蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚計(jì)算均不低于10 000,5個(gè)成分與相鄰峰之間分離度均大于1.5,對(duì)稱因子在0.95～1.05之間。

　　2.2 對(duì)照品溶液的制備

　　精密稱取五氧化二磷減壓干燥的蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對(duì)照品適量,加甲醇分別制成1 mL含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚各約0.2 mg的溶液;分別精密量取上述對(duì)照品溶液2 mL置10 mL量瓶中,混勻,即得。

　　2.3 供試品溶液的制備

　　參照文獻(xiàn)[3-4]隨機(jī)取黃芎抗栓膠囊5粒,除去膠囊殼,內(nèi)容物混勻,精密稱取內(nèi)容物約0.5 g,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25 mL,稱定重量,超聲(功率300 W,頻率50 kHz),放冷,再稱定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過。精密量取續(xù)濾液5 mL,置燒瓶中,揮去溶劑,加8%鹽酸溶液10 mL,超聲處理2 min,再加三氯甲烷10 mL,加熱回流1 h,放冷,置分液漏斗中,用少量三氯甲烷洗滌容器,并入分液漏斗中,分取三氯甲烷層,酸液用三氯甲烷提取3次,每次10 mL,合并三氯甲烷液,減壓回收溶劑至干,殘?jiān)�加甲醇使溶�?轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。

　　2.4 專屬性試驗(yàn)

　　按處方比例制成缺大黃陰性對(duì)照品,按“2.3”項(xiàng)下方法制備缺大黃陰性樣品溶液。精密吸取上述對(duì)照品、供試品、陰性樣品溶液各20/L,照“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果陰性樣品溶液在各對(duì)照品保留時(shí)間位置上均未見干擾。

    2.5 線性關(guān)系考察

　　精密量取含蘆薈大黃素(0.230 mg/mL)、大黃酸(0.224 mg/mL)、大黃素(0.223mg/mL)、大黃酚(0.257 mg/mL)、大黃素甲醚(0.287 mg/mL)的混合對(duì)照品溶液0.5、1、2、4、8 mL,分別置10 mL量瓶中,加甲醇定容至刻度,搖勺,0.45 ?m微孔濾膜濾過,按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定,每次進(jìn)樣20 ?L。以進(jìn)樣濃度(?g/mL)為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,計(jì)算其回歸方程及線性范圍。蘆薈大黃素：Y=161 803X-131 692,r=0.999 8,線性范圍0.230～3.68 ?g;大黃酸：Y=154 631X+52 006,r=0.999 9,線性范圍0.224～3.584 ?g,大黃素：Y=152 878X-791 770,r=0.999 8,線性范圍0.223～3.568 ?g;大黃酚：Y=163 597X-129 101,r=0.999 9,線性范圍0.257～4.112 ?g;大黃素甲醚：Y=158 720X-132 792,r=0.999 8,線性范圍0.287～4.592 ?g。

　　2.6 精密度試驗(yàn)

　　精密量取供試品溶液20 ?L,連續(xù)進(jìn)樣5次,測(cè)得蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚峰面積的RSD分別為0.78%、0.91%、0.37%、0.46%、0.24%,表明精密度較好。

　　2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

　　取供試品溶液,分別在0、2、4、8、12、24 h按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定,測(cè)得樣品中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚峰面積的RSD分別為1.78%、1.06%、1.86%、2.19%、2.37%,表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

　　2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

　　取同一批樣品,平行制備 6 份供試品溶液,按上述色譜條件測(cè)定峰面積并計(jì)算蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚及大黃素甲醚的含量,其RSD分別為2.11%、1.93%、1.58%、1.94%、2.41%。

　　2.9 加樣回收率試驗(yàn)

　　精密稱取已知含量的樣品(含蘆薈大黃素2.359 mg/g、大黃酸3.695 mg/g、大黃素3.137 mg/g、大黃酚4.257 mg/g和大黃素甲醚1.996 mg/g)6份,每份適量,分別精密加入一定量的蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚對(duì)照品,按“2.3”項(xiàng)下方法制成溶液,按上述色譜條件測(cè)定,計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

　　2.10 樣品的測(cè)定

　　取3批抗栓膠囊,按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品,每批樣品3份。精密吸取供試品溶液20 /L,按照上述色譜條件測(cè)定并計(jì)算含量,結(jié)果見表2。表2 黃芎抗栓膠囊中5種大黃成分含量測(cè)定結(jié)果(mg/g,n=3)

　　3 討論

　　抗栓膠囊由大黃、川芎等4味中藥組成,大黃為方中君藥,通過控制大黃中有效成分的含量可以很好地控制該制劑的質(zhì)量。大黃中蒽醌類成分含量測(cè)定方法文獻(xiàn)報(bào)道較多,色譜條件及制備方法也多種多樣,但多采用單一成分含量的測(cè)定,不能全面控制制劑的質(zhì)量。本課題組在以往的研究中曾用薄層色譜法測(cè)定了3批樣品中大黃素的含量,本試驗(yàn)的目的旨在更進(jìn)一步提高該制劑的質(zhì)量控制水平。由于大黃中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚5種蒽醌類成分的含量均較高,故選擇以上5種蒽醌類成分作為含量測(cè)定的指標(biāo)成分。筆者在本項(xiàng)目的研究工作中,參照2005年版《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)“大黃”項(xiàng)下制備方法[5],并采用其測(cè)定波長(zhǎng)254 nm同時(shí)對(duì)5種蒽醌類成分進(jìn)行定量測(cè)定,試驗(yàn)結(jié)果表明該方法可行,分離度較高,可作為抗栓膠囊的質(zhì)量控制方法。

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