附桂骨痛片復方是取自《金匱要略》烏頭湯之精華組方，由附子、川烏、肉桂、黨參、當歸、白芍、淫羊藿、乳香8味中藥組成，其獨特的組方，對于陽虛寒濕型頸椎及膝關節增生性關節炎具有良好的治療作用，臨床試驗有效率達95％，是治療此類疾病的理想藥物。此復方中，附子和Jil烏中所含的烏頭類總生物堿是附桂骨痛片復方中的主要有效成分。質量標準中生物堿含量的測定方法采用簡單的萃取稱重法H，缺乏可靠性和準確性，而目前關于附桂骨痛片復方中總生物堿含量的檢測方法的相關文獻報道幾乎空白。為有效控制藥品質量，根據生物堿和酸性染料溴甲酚綠在酸性緩沖液中形成的絡合物在特定波長下有吸收的原理，本文采用酸性染料比色法測定其中總生物堿的含量，并對其方法學進行了考察。 

    分析方法條件優化：酸性染料比色法成功與否的關鍵在于水相的pH值，pH過高或過低都不能使酸性染料與生物堿完全絡合，影響測量結果的真實性。分別配制pH值為3．00，3．40，3．50，3．60，4．00，4．50，5．00的檸檬酸．磷酸氫二鈉緩沖液。烏頭堿與BCG形成的絡合物在412．5 nm波長處有最大吸收峰，因此取相同量的對照品溶液，于412．5 nm 波長處測定不同pH值水相下的吸光度值。不同pH值對烏頭堿與溴甲酚綠離子對形成程度關系。結果表明在緩沖液pH值為3．50的環境下，烏頭堿與溴甲酚綠離子對形成程度較大，pH值進一步加大或減小，離子對形成程度都減小。故采用pH值為3．50的檸檬酸一磷酸氫二鈉緩沖液作為最適的水相。本文曾用過醋酸一醋酸鈉緩沖溶液 ，可能由于它的緩沖范圍比較窄。 

    附桂骨痛片復方中藥味較多，提取液成份復雜，為考察本方法對烏頭總生物堿測定的唯一性，進行專屬性試驗。除去處方藥中川烏和附子，模仿附桂骨痛片復方的制備工藝，按上述方法制備陰性供試品溶液并在300～500 nm波長范圍內掃描吸光度值，。實驗結果表明其陰性樣品液在412．5 nm波長處無吸收，說明該方法用于測定烏頭類總生物堿有很好的專屬性。目前烏頭總生物堿的測定主要有兩種方法：中和法和酸性染料比色法。中和法一般用于川烏、草烏、附子單味藥材烏頭總生物堿含量測定。本文曾嘗試用中和法測定附桂骨痛片復方中總生物堿的含量，但是重現性不夠理想，靈敏度差，可能是由于復方中成分復雜，干擾因素較多造成的。 

    采用pH值為3．5的檸檬酸．磷酸氫二鈉作緩沖液，在萃取液靜置0．5～3．0 h內，于412．5 nm波長處測定吸光度，穩定性良好。 

    烏頭堿質量濃度在10．12～22．77 t~g／mL范圍內與吸光度線性關系良好(r=0．9996，，l=6)，其平均加樣回收率為99．27％。酸性染料比色法方法準確，可作為附桂骨痛片復方的定量測定方法。

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