銀屑病是一種多基因遺傳性皮膚病，具體發(fā)病機(jī)制不明，治療困難，易復(fù)發(fā)。臨床中阿維A聯(lián)合窄譜中波紫外線（NB-UVB）是治療銀屑病的常用方法，且療效顯著。本研究應(yīng)用免疫組化方法檢測尋常型銀屑病經(jīng)阿維A聯(lián)合NB-UVB治療前后皮損中Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表達(dá)，以期探討上述治療方法在尋常型銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)中的可能作用。

　　目的：探討阿維A聯(lián)合窄譜中波紫外線（NB-UVB）在尋常型銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡中的可能作用。方法：20例正常皮膚組織，30例尋常型銀屑病患者給予阿維A聯(lián)合NB-UVB治療，療程8周，取治療前后標(biāo)本，用免疫組化方法檢測正常皮膚及治療前后皮損的Bcl-2、 Caspase-3、 Survivin的表達(dá)情況，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：和正常皮膚比較，尋常型銀屑病皮損中Bcl-2低表達(dá)，Caspase-3、 Survivin高表達(dá)（P<0.01），治療后Bcl-2表達(dá)上調(diào)，Caspase-3、Survivin表達(dá)下調(diào)（P<0.01），三者均有向其在正常組織表達(dá)狀況轉(zhuǎn)化的趨勢。結(jié)論：阿維A聯(lián)合NB-UVB可能通過調(diào)節(jié)Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表達(dá)而調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞的凋亡達(dá)到治療目的。

　　1 資料與方法

　　1.1 一般資料

　　30例尋常型銀屑病患者，男18例，女12例；病程1個(gè)月~10年，均來自我科門診及病房，均經(jīng)病理證實(shí)診斷且無治療禁忌癥。治療前取標(biāo)本并固定、包埋。給予阿維A （方希，重慶華邦制藥股份有限公司）聯(lián)合NB-UVB治療，口服阿維A 30 mg/d,病情好轉(zhuǎn)后改為10~20 mg/d,同時(shí)患者接受311 nm NB-UVB治療（SS-03B型紫外線光療儀，上海希格瑪高技術(shù)有限公司），皮損處照射，初始劑量為0.15 J/cm2,每周2次，每次劑量遞增0.03 J/cm2,最大劑量達(dá)0.8 J/cm2.8周后環(huán)鉆取治療后皮損標(biāo)本，甲醛固定，石蠟包埋。對照組20例皆取自我院整形外科手術(shù)切除的正常人皮膚。

　　1.2 試驗(yàn)試劑

　　鼠抗人多克隆抗體Bcl-2、Caspase-3 ,兔抗人多克隆抗體Survivin,SP免疫組化染色試劑盒（即用型）及DAB顯色劑等。

　　1.3 檢測方法

　　采用SP免疫組化法進(jìn)行檢測，按產(chǎn)品使用說明書操作，二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色，蘇木素復(fù)染，脫水，透明，封片后光鏡下觀察并攝片。用乳腺癌組織做陽性對照，陰性對照滴加PBS液代替一抗。

　　1.4 結(jié)果判定

　　切片標(biāo)本中可見胞漿或胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃或棕褐色均勻分布的顆粒狀沉積物為陽性細(xì)胞，Bcl-2蛋白陽性反應(yīng)均定位在細(xì)胞核；Caspase-3陽性反應(yīng)定位在細(xì)胞漿及細(xì)胞核內(nèi)；Survivin蛋白陽性反應(yīng)均定位在細(xì)胞漿及細(xì)胞核內(nèi)。陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)以在40×10倍顯微鏡下，每一切片取5個(gè)不同視野，計(jì)數(shù)平均每一高倍視野中的陽性細(xì)胞數(shù)列入分析[1].

　　1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

　　應(yīng)用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以x-±s表示，采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

　　2 結(jié)果

　　與正常組織比較，尋常型銀屑病治療前皮損中Bcl-2低表達(dá)（t=39.884,P=0.000），Caspase-3（t=50.225,P=0.000）、Survivin（t=21.434,P=0.000）呈高表達(dá)；阿維A聯(lián)合NB-UVB治療后尋常型銀屑病皮損中Bcl-2表達(dá)由治療前（6.20±1.63）上調(diào)至治療后（12.23±2.06）（t=14.39,P=0.000），Caspase-3表達(dá)由治療前（21.07±3.14）下調(diào)至治療后（10.07±2.13）（t=22.83,P=0.000），Survivin表達(dá)由治療前（22.97±3.03）下調(diào)至治療后（12.63±2.61）（t=16.76,P=0.000）。見表1.治療前后3種蛋白的表達(dá)情況見圖1~6.經(jīng)治療PASI評分由治療前（14.26±3.48）降至治療后（4.12±1.53），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=14.628,P=0.000）。表1 阿維A治療前后皮損中3種蛋白表達(dá)比較 圖1 治療前Bcl-2低表達(dá) （SP×400），圖2 治療后Bcl-2表達(dá)上調(diào)（SP×400）圖3 治療前Caspase-3高表達(dá)（SP×400），圖4 治療后Caspase-3表達(dá)下調(diào)（SP×400）

　　3 討論

　　目前認(rèn)為，Caspase家族、Bcl-2基因家族是凋亡信號調(diào)控圖5 治療前Survivin高表達(dá)（SP×400），圖6 治療后Survivin表達(dá)下調(diào)（SP×400）中的2個(gè)關(guān)鍵因素，Survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成員。有研究表明Bcl-2蛋白抑制細(xì)胞凋亡，延長細(xì)胞的生存時(shí)間，而不能促進(jìn)細(xì)胞增殖；Caspase-3是細(xì)胞凋亡過程中的主要效應(yīng)因子； Survivin具有抑制凋亡和促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂的作用。

　　維甲酸能夠誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞凋亡，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的生長、分化，具有顯著抗腫瘤作用[2,3].阿維A主要基于對細(xì)胞增殖和分化的調(diào)控作用，能影響核苷酸轉(zhuǎn)錄過程，抑制DNA合成和細(xì)胞增殖[4].文獻(xiàn)報(bào)道，全反式維甲酸（all-trans retinoic acid,ATRA）作用于人食管癌及胰腺癌細(xì)胞株后，細(xì)胞株的生長被抑制的同時(shí)，Survivin的表達(dá)均下調(diào)[5,6].近年來， NB-UVB被廣泛地應(yīng)用于臨床治療白癜風(fēng)、銀屑病、特應(yīng)性皮炎及其它皮膚病，并取得了較好的療效。表皮的黑素細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞均是NB-UVB輻射的主要靶細(xì)胞。NB-UVB照射后可使正常皮膚發(fā)生角化不良、棘層肥厚、海綿形成、炎癥細(xì)胞浸潤，這些表明NB-UVB照射可影響角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖和分化[7].

　　本研究發(fā)現(xiàn)，尋常型銀屑病經(jīng)阿維A聯(lián)合NB-UVB治療后Bcl-2表達(dá)上調(diào)，Caspase-3、Survivin表達(dá)下調(diào)。治療后Bcl-2表達(dá)增高，延長了角質(zhì)形成細(xì)胞的生存期，Caspase-3表達(dá)下調(diào)，抑制了角質(zhì)形成細(xì)胞的凋亡，從而使尋常型銀屑病皮損的表皮通過時(shí)間延長，達(dá)到治療效果；經(jīng)治療Survivin表達(dá)的下調(diào)，抑制了角質(zhì)形成細(xì)胞異常的有絲分裂，減少角質(zhì)形成細(xì)胞增殖。

　　由此推測Bcl-2、Caspase-3、Survivin在尋常型銀屑病的發(fā)病中可能起一定作用，阿維A聯(lián)合NB-UVB可能通過調(diào)節(jié)Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表達(dá)來調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞的凋亡而達(dá)到治療目的，由于病例數(shù)有限，其機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

　　（參考來源：《阿維A聯(lián)合窄譜中波紫外線對尋常型銀屑病皮損中Bcl-2、Caspase-3、Survivin的調(diào)節(jié)作用》秦蘭英 邢衛(wèi)斌 葉文靜 趙子申 付國俊，《河北醫(yī)藥》2011年8月33卷16期）。

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