環(huán)孢素A（新山地明，Cyclosporin A，CsA）自20世紀(jì)70年代應(yīng)用于臨床以來，作為免疫抑制劑發(fā)揮了極其重要的作用；環(huán)孢素A（新山地明）是目前公認(rèn)的抑制移植排斥反應(yīng)最為有效的藥物。環(huán)孢素A（新山地明）對某些自身免疫性疾病的治療亦已取得一定的療效。正常生理妊娠類似于同種異體移植，胚胎作為自然的同種移植物不受母體免疫排斥是免疫排斥現(xiàn)象的唯一例外，實(shí)際上反映母體對胚胎的免疫耐受。而妊娠失敗多因母體對胚胎的免疫排斥所致。

　　研究發(fā)現(xiàn)，于孕早期（胚胎著床期）腹腔注射CsA，可恢復(fù)小鼠妊娠失敗模型母—胎界面Th1/Th2/Th3型細(xì)胞因子免疫調(diào)節(jié)的生理平衡，形成維持正常妊娠所需的Th2/3型免疫偏倚，并誘導(dǎo)外周免疫細(xì)胞對父系抗原的免疫耐受，使流產(chǎn)模型的妊娠預(yù)后達(dá)到正常妊娠水平；體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)CsA可刺激人早孕期滋養(yǎng)細(xì)胞生長，并改變其細(xì)胞形態(tài)，使其遷移能力及侵襲性增強(qiáng)。采用抑制性差減雜交法獲得在CsA作用于人JAR細(xì)胞系后6個(gè)高表達(dá)基因，其中1個(gè)為已知基因，2個(gè)為功能未知的mRNA，3個(gè)為位于16號染色體上的EST。顯然CsA對母胎界面具有良好的調(diào)節(jié)作用。

　　滋養(yǎng)細(xì)胞攜帶來自胎兒的外胚層抗原，是母胎界面唯一與母體免疫系統(tǒng)直接接觸的胎兒細(xì)胞，在母胎免疫耐受中發(fā)揮重要作用。許多病理性妊娠，如反復(fù)自然流產(chǎn)、妊高征及胎兒宮內(nèi)生長遲緩等均伴有滋養(yǎng)細(xì)胞某些生物學(xué)功能異常。以CsA作為研究工具，觀察CsA對細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)功能及功能基因表達(dá)的影響，并進(jìn)一步解析其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，對于解析CsA新的藥效機(jī)制，具有重要意義。

　　環(huán)孢素A（新山地明）研究通過原代培養(yǎng)早孕期人細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞及JAR滋養(yǎng)細(xì)胞株，在CsA作用下，研究作為自然移植物的細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)功能及功能基因表達(dá)的改變及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。為反復(fù)自然流產(chǎn)等妊娠疾患的治療提供線索。

環(huán)孢素A（新山地明）對人早孕期細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定

　　目的 環(huán)孢素A（新山地明）對建立早孕期人細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞的分離、純化方法，了解CD133在滋養(yǎng)層細(xì)胞的表達(dá)情況，為鑒定滋養(yǎng)層細(xì)胞株及原代分離的細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞提供新的細(xì)胞內(nèi)標(biāo)志。

　　方法 通過胰蛋白酶/DNase Ⅰ分步消化，Percoll密度梯度離心法分離純化細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞，經(jīng)抗Cytokeratin7、Vimentin單克隆抗體免疫細(xì)胞化學(xué)和流式細(xì)胞術(shù)鑒定其純度。采用三種不同的CD133熒光標(biāo)記的單克隆抗體在70％的甲醇固定前后對原代分離的細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞和絨毛膜上皮癌細(xì)胞株（JAR）行流式細(xì)胞術(shù)（FCM）分析。

　　結(jié)果 抗Cytokeratin7、Vimentin單克隆抗體行免疫細(xì)胞化學(xué)和流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞純度達(dá)95％以上。70％甲醇固定前，三種CD133單克隆抗體均不能與滋養(yǎng)層細(xì)胞反應(yīng)；70％甲醇固定后，抗CD133-1（AC133-1-APC）、抗CD133-2（293C3-PE）仍不能與滋養(yǎng)層細(xì)胞反應(yīng)，而抗CD133-2（AC141-PE）與細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞胞內(nèi)抗原結(jié)合。AC141陽性的細(xì)胞也是Cytokeratin7陽性的細(xì)胞。

　　綜上所述，胰蛋白酶/DNase Ⅰ分步消化，Percoll密度梯度離心法可簡單、快速獲得高純度人早孕期細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞。CD133-2/AC141可作為細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞鑒定的一種可靠細(xì)胞內(nèi)標(biāo)志。

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