塞隆骨,是高原特有動(dòng)物高原鼢鼠的全骨風(fēng)干品。是我國(guó)建國(guó)以來(lái)第一個(gè)國(guó)家級(jí)一類(lèi)動(dòng)物藥材,其性微溫、味辛咸,人肝腎經(jīng),主要功能為驅(qū)風(fēng)除濕、散寒、舒筋活絡(luò)、強(qiáng)筋健骨及增強(qiáng)機(jī)體抗力等。據(jù)報(bào)道,塞隆骨具有抗炎鎮(zhèn)痛作用并能1:1替代虎骨,塞隆風(fēng)濕酒試驗(yàn)和細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)結(jié)果均呈陰性。塞隆骨的藥用價(jià)值已經(jīng)受到了眾多醫(yī)藥工作者的關(guān)注,尤其是對(duì)于
類(lèi)風(fēng)濕性
關(guān)節(jié)炎的治療作用成為研究者關(guān)注的焦點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)室一直在進(jìn)行復(fù)方塞隆膠囊骨治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)的研究工作。前期的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)已經(jīng)充分證明復(fù)方塞隆膠囊骨對(duì)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有非常好的治療預(yù)防效果,且具有鎮(zhèn)痛,抗凝血等作用。為了進(jìn)一步研究復(fù)方塞隆膠囊骨,為其深層次開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)本實(shí)驗(yàn)室對(duì)復(fù)方塞隆膠囊骨的做用機(jī)制進(jìn)行了初步研究。
受試藥物:復(fù)方塞隆膠囊骨提取物(SLG.B)。高原鼢鼠捕于青海省海北州。復(fù)方塞隆膠囊骨提取物由本實(shí)驗(yàn)室提取,先分離全:復(fù)方塞隆膠囊骨提取物對(duì)卵清
白蛋白誘導(dǎo)小鼠免疫亢進(jìn)的抑制作用 65骨,陰干,粉碎,混合取樣,去離子水煎煮提取,減壓濃縮,得干粉,冰箱保存?zhèn)溆谩L崛∥镏饕煞譃楣悄z蛋白,蛋白含量大于75%。所得干粉溶于十倍量的水中超聲溶解、離心、取上清。所得上清加無(wú)水乙醇至終濃度為50% ,靜置、待沉淀完全、離心、沉淀80℃烘干得50% 部分。離心所得上清加無(wú)水乙醇至終濃度為90% ,靜置、離心,沉淀部分烘干即得90%醇沉部分,此部分為本試驗(yàn)所用有效部位。
方法與結(jié)果:小鼠遲發(fā)性超敏反應(yīng)雌性BALB/c小鼠每組8只,分5組,分別是模型組、SLG—B高、中、低劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組,造模前一天開(kāi)始給藥,給藥量見(jiàn)表1。0.5%DNFB取適量DNFB溶于丙酮:橄欖油=4:1的溶劑中終濃度0.5% 。day 0:將0.5% 的DNFB溶液用槍緩慢加到BALB/C雌鼠的后腳上致敏(每只后腳2O L)。次日加強(qiáng)一次。初次致敏后第9 d,用20 IxL 0.4%DNFB攻擊鼠左耳,內(nèi)外兩側(cè)各1O L。攻擊后24~ 48 h后脫頸椎處死小鼠,8 mm打孔器打耳片稱(chēng)重,以左右耳的差值作為腫脹度。結(jié)果見(jiàn)表1。測(cè)定結(jié)果以 ±s表示,采用單因素方差分析進(jìn)行組間差異的比較。
復(fù)方塞隆膠囊骨提取物體內(nèi)給藥對(duì)OVA誘導(dǎo)的小鼠免疫功能的影響
試驗(yàn)結(jié)果:結(jié)果顯示,與未免疫組小鼠相比,OVA+CFA免疫小鼠的OVA特異性細(xì)胞增殖反應(yīng),產(chǎn)生免疫增強(qiáng)型細(xì)胞因子以及產(chǎn)生OVA特異性抗體的能力顯著提高。SLG.B體內(nèi)給藥21 d對(duì)OVA誘導(dǎo)的小鼠淋巴結(jié)及脾臟淋巴細(xì)胞的OVA特異性增殖具有抑圖1 SLG.B體內(nèi)給藥對(duì)小鼠外周淋巴細(xì)胞OVA特異性
增殖的影響。
體內(nèi)給藥后,取不同組的淋巴細(xì)胞和脾細(xì)胞在體外再加抗原或不加培養(yǎng)時(shí),均能產(chǎn)生一定量的IFN ,且給藥組與對(duì)照相比能夠降低細(xì)胞因子IFN的產(chǎn)生。IgG是血清中含量最高的抗體,在體液免疫中發(fā)揮重要作用。經(jīng)SLG。B給藥后小鼠血清中抗體的含量有所降低。
通過(guò)對(duì)復(fù)方塞隆膠囊骨提取物的實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)SLG.B具有很強(qiáng)的免疫抑制作用。在OVA小鼠免疫模型上,SLG.B體內(nèi)給藥能抑制OVA誘導(dǎo)的特異性淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng);通過(guò)免疫磁珠法分離脾細(xì)胞中的T細(xì)胞及抗原呈遞細(xì)胞(APC)進(jìn)行體外培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)SLG—B對(duì)淋巴細(xì)胞增值的抑制作用主要是針對(duì)APC細(xì)胞的。同時(shí)觀(guān)察了SLG—B對(duì)OVA小鼠脾細(xì)胞因量子IFN產(chǎn)生的抑制作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn)SLG—B可以明顯抑制小鼠腹脾細(xì)胞產(chǎn)生IFN一 (P<0.O5或P<0.o1)。我們的實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)SLG—B治療組對(duì)OVA免疫小鼠血清中IgG抗體的產(chǎn)生有一定的抑制作用。說(shuō)明SLG-B在免疫抑制起效過(guò)程中其作用靶點(diǎn)與APC及B淋巴細(xì)胞有關(guān)。
通過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)SLG—B主要是通過(guò)抑制APC細(xì)胞來(lái)抑制免疫亢進(jìn)發(fā)生的,從而達(dá)到抑制類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。因此研究APC及其產(chǎn)生的細(xì)胞因子有助于進(jìn)一步明確SLG.B的作用機(jī)制。
參考文獻(xiàn):《塞隆骨提取物對(duì)卵清白蛋白誘導(dǎo)小鼠免疫亢進(jìn)的抑制作用》 趙曉輝 岳會(huì)蘭 蔣福全 邵赟 梅麗娟 陶燕鐸 中國(guó)科學(xué)院西北高原生物研究所 西寧810008 中國(guó)科學(xué)院研究生院 北京100049 《天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)》2009年 第B05期