摘要：目的 探討通絡生骨膠囊對激素性股骨頭缺血性壞死的預防作用。方法 建立大鼠激素性股骨頭缺血性壞死模型。SD大白鼠120只隨機分成正常組、模型組、安妥明組、通絡生骨膠囊高、中、低劑量組。每周注射激素1次，每日灌胃藥物1次。于實驗后第4周、第8周、第12周分3批處死動物，進行股骨頭大體形態及光鏡檢查，墨汁灌注透明片觀察，并用全自動圖象分析處理系統進行病理圖象的分析處理、骨的組織形態學和計量學分析。結果 通絡生骨膠囊各組骨小梁質量較好，與正常組基本一致；空骨陷窩率較模型組顯著降低；股骨頭髓腔中脂肪變性程度較模型組明顯減輕；軟骨下血管計數及軟骨下區小血管直徑與模型組比較有顯著增加（P<0.01），光鏡下小血管結構較模型組完整，無明顯髓腔內出血征象；墨汁灌注透明片顯示血管密度較模型組及安妥明應用組顯著增高（P<0.01）；成骨細胞計數較模型組顯著增加（P<0.01），破骨細胞計數較模型組顯著降低（P<0.01）。結論 通絡生骨膠囊對激素性股骨頭缺血性壞死有明顯的預防作用。

    通絡生骨膠囊是廣州中醫藥大學袁浩教授在挖掘民間用藥經驗的基礎上結合多年臨床實踐篩選出來的治療股骨頭缺血性壞死的有效方藥，該方由單味藥木豆葉組成，具有補腎健骨、活血化瘀、消腫止痛的功效。本文研究通絡生骨膠囊預防激素性股骨頭缺血性壞死的藥效學，為臨床應用提供實驗依據。
 
l 材料與方法 
    1.1藥品與試劑 通絡生骨膠囊，0.5 g/粒，廣州中醫藥大學中藥與保健研究所提供，批號960227，用水溶解，調制成懸浮液；醋酸強的松龍，江蘇揚州制藥廠生產，批號970397；安妥明，廣州明興制藥廠生產，批號971001。 
  
    1.2動物 健康純種SD大白鼠120只，體重250～300 g，雌雄各半，由廣東省實驗動物中心提供動物，合格證號96A02。 
 
    1.3主要儀器 Olypotums光學顯微鏡；Mortmoph全自動圖象分析系統；Leica全自動照相系統，美國，Leica公司。 

 
    1.4方法 
    1.4.1造模、分組與給藥 SD大白鼠120只，隨機分為6組：正常組，模型組，安妥明組，通絡生骨膠囊高劑量組、中劑量組、低劑量組。除正常組外，各組均每周1次注射醋酸強的松龍（24.5 mg/kg）造模，在造模同時，各給藥組均按表1劑量灌胃給藥，模型組和正常組給予等量生理鹽水。 
 
    1.4.2檢測指標 于實驗后第4周、第8周、第12周分3批處死動物。進行股骨頭大體觀察（包括骨頭外形，關節軟骨色澤、外形）和組織學觀察。病理組織制片：將股骨頭沿冠狀面劈開，用10％的福爾馬林固定，5％ 的硝酸溶液脫鈣，石蠟包埋，切片后一份作HE染色，一份做V.G染色，一份作Masson三色染色。墨汁灌注透明標本制備：將動物用戊巴比妥鈉麻醉后，取腹部正中切口，顯露腹主動脈和下腔靜脈，分別插上導管，經腹主動脈持續恒壓注入37.2 ℃肝素生理鹽水，直到下腔靜脈導管流出清澈溶液，再灌入2.5％ 戊二醛溶液，最后注入墨汁至老鼠雙足趾甲下顏色轉黑。取出股骨頭放于4 ℃的冰箱中24 h，用10％ 甲醛固定，鹽酸混合液脫鈣，酒精逐級脫水，制成30 μm冠狀面連續切片，再經二甲苯透明后封片。 
 
    1.5統計處理 實驗數據用“χ(-)±s”表示，結果采用SPSS10.0統計軟件包處理，統計方法為方差分析、q檢驗。
 
2 結果 
    2.1大體觀察 在實驗動物中，無一例股骨頭出現塌陷，模型組股骨頭關節軟骨微黃，少光澤，甚至軟骨下有暗紅瘀斑，但無塌陷，12周標本較第4周易切鑿。 
 
    2.2鏡下觀察 （1）正常組：骨小梁整齊清晰，排列規則，致密飽滿；骨細胞清晰可見，偶見骨陷窩空虛；軟骨下血管較豐富，結構清晰；髓腔內生血細胞豐富；骨小梁周沿成骨細胞數量多；墨汁灌注標本顯示毛細血管豐富，交織成網狀，邊緣清晰。 
 
    （2）模型組：骨小梁稀疏，變細，甚至斷裂，結構紊亂，有碎片；骨細胞壞死，空骨陷窩明顯增多；軟骨下血管數量明顯減少，管壁結構破壞，彈性纖維斷裂。髓腔內脂肪細胞體積增大，有的融合成泡狀，生血細胞數量減少；骨小梁周沿成骨細胞數量很少，髓腔內多核破骨細胞數量增多；墨汁灌注標本顯示毛細血管稀疏，邊緣不清，血竇欠豐富，數量少；上述病理表現隨著時間的推移逐漸加重。 
  
    （3）安妥明組：骨小梁細長，偶有斷裂；空骨陷窩較少，但仍可見；骨髓內生血細胞無明顯空泡變性；成骨細胞數量及破骨細胞數量較少，骨小梁周沿無明顯新骨沉積生長；軟骨下血管數量欠豐富，軟骨下髓腔內亦可見陳舊出血跡象；墨汁灌注標本毛細血管數量較少，血竇欠豐富，數量少，無明顯墨汁彌散。 
 
    （4）通絡生骨膠囊組：①高劑量組骨小梁排列整齊，規則，致密飽滿，無碎裂；中劑量排列尚整齊規則，但稍欠飽滿；低劑量可見部分稀疏瘦長征象。 
 
    ②高劑量組骨小梁上骨細胞核清晰可見，位于中央，少見空骨陷窩存在，與正常組比較無顯著性差異（P>0.05）；中、低劑量組可見部分空骨陷窩，但明顯少于模型組（P<0.01）。③ 軟骨細胞排列整齊，軟骨下血管豐富，Masson三色與V.G染色示小血管壁清晰正常。④髓腔內造血細胞豐富，無明顯大的脂肪滴；⑤骨小梁周沿梭形成骨細胞數量增多，排列致密，Masson三色提示骨小梁周沿有一層具有活性的新生骨存在；⑥墨汁透明標本顯示毛細血管致密，邊沿清晰，血竇豐富，數量多，周沿無明顯墨汁彌散；各時間點病理表現無明顯差別。結果見表1～3。

3 討論
    Pietrogrand和Mastomarine于1957年首先報告了短期大劑量使用激素可引導起股骨頭壞死，其主要表現為出現明顯的空骨陷窩，骨小梁稀疏、碎裂，甚至出現了整塊死骨，髓腔生血細胞廣泛脂肪空泡化，血管密度、結構均有顯著破壞。目前認為激素導致凝溶紊亂、血液流變性改變，高血脂血癥與微血栓的形成，NO合成減少與血栓的形成，最后使股骨頭血供異常，因營養供給不足、不能及時將代謝產物清除而致股骨頭細胞壞死，但發病機理仍未能完全闡明。本實驗模型組出現以上顯著表現，提示單純激素足已導致骨壞死。 
  
    安妥明又名氯苯丁脂，是一種降血脂藥物，早在1978年Wang應用脂質清除劑安妥明治療兔激素性股骨頭缺血性壞死，認為能抑制骨髓脂肪細胞病理性肥大，改善股骨頭血運。周謀望等認為是安妥明改善了激素所致的脂質代謝紊亂，從而保護股骨頭骨細胞免受激素損傷。本實驗也表明安妥明對于髓腔生血細胞的脂肪化是有一定效果的，可抑制空骨陷窩率降低，但不能提高血管的數量、周徑、血管密度與直徑，說明其對血管無保護作用。 
  
    通絡生骨膠囊3個劑量組可提高空骨陷窩率、骨小梁面積、血管密度、軟骨下小血管的數量與直徑、成骨細胞計數等，說明通絡生骨膠囊具有預防激素性股骨頭壞死的作用。Satio認為反復的髓腔內出血與股骨頭缺血性壞死的發病機理密切相關，小動脈的血管壁結構損害和血管組織破裂的痕跡被認為是股骨頭壞死的特征表現，并且和髓腔內出血及骨小梁、骨髓壞死密切相關。本組實驗中模型組軟骨下的小動脈出現了內膜增生、中膜變性、平滑肌細胞壞死，肌纖維斷裂以及反復的髓腔內出血，墨汁灌注標本出現區域性的墨汁缺乏現象，說明激素在導致股骨頭缺血性壞死過程中，血管的損害（包括破裂和栓塞）是一個相當重要的環節，而通絡生骨膠囊各劑量組動物這種現象得到了大大抑制與改善。我們的前期研究曾發現通絡生骨膠囊能顯著提高大鼠腸系膜微循環的血液流速、流速微積分和流態微積分；還能降低大鼠急性血瘀模型的全血比粘度、血漿比粘度和血沉；結合本試驗結果，推測可能是由于通絡生骨膠囊具有明顯的活血化瘀作用，能顯著促進血管生長，使壞死組織再血管化，保護和改善了血管結構，保證了組織的有效灌注，使骨細胞得以進行正常的代謝而預防了壞死。 
  
    大量激素導致股骨頭內的骨細胞壞死，同時也抑制了成骨細胞的活性。實驗結果表明，通絡生骨膠囊組的成骨細胞數顯著高于模型組，Masson三色染色切片中，壞死的骨小梁周圍出現了充滿活性的新生骨，這說明通絡生骨膠囊能夠激發成骨細胞的活性，調節骨的代謝，促進新骨生長，使成骨細胞數量增多，從而促進新生骨的形成，維持了骨組織的力學框架，這可能是通絡生骨膠囊治療激素性股骨頭壞死另一個原因。 
  
    綜上所述，通絡生骨膠囊對激素性股骨頭缺血性壞死有明顯的預防作用，其作用途徑可能是：（1）保護和改善微循環，保證了骨組織的有效灌注，使由于脂質代謝紊亂帶來的有毒物質及時得到轉輸與排泄，給骨細胞生長提供一個良好的內外環境。（2）增強骨細胞的活力，預防了骨細胞內脂肪的異常堆積，激發成骨細胞活性、調節骨的代謝、促進骨的生長，保持了骨小梁的完整結構。

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