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【摘要】目的 探討富半胱氨酸蛋白61、雌激素受體與孕激素受體在子宮肌瘤中的各自表達(dá)情況和相互關(guān)系，為明確子宮肌瘤病因提供科學(xué)依據(jù)。方法 選取入院治療子宮肌瘤并行全切術(shù)的45例患者作為試驗(yàn)組，采用免疫組織化學(xué)法，檢測(cè)CYR61、ER、PR在子宮全切標(biāo)本肌瘤組織中的表達(dá)，對(duì)照組為相應(yīng)樣本的非瘤平滑肌正常組織。結(jié)果 ER和PR在子宮全切標(biāo)本肌瘤組織中的表達(dá)明顯高于對(duì)照組，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；PR的表達(dá)水平高于ER，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；CYR61在子宮全切標(biāo)本肌瘤組織中的表達(dá)明顯低于對(duì)照組，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論 CYR61、ER和PR表達(dá)與子宮肌瘤的發(fā)生有密切關(guān)系，三者及其相互作用可能是促進(jìn)子宮肌瘤繼續(xù)發(fā)展的重要因素。

【關(guān)鍵詞】子宮肌瘤；富半胱氨酸蛋白61；雌激素受體；孕激素受體

子宮肌瘤(uterine leiomyoma，UL)是一種常見的女性生殖系統(tǒng)的良性腫瘤，由子宮平滑肌細(xì)胞增生而成，也包含少量結(jié)締組織纖維，在我國(guó)近年來呈逐步上升的發(fā)病趨勢(shì)，研究統(tǒng)計(jì)資料顯示40~50歲發(fā)病人群居多，約為52.2% ~60.0%，因2/3的患者可沒有明顯癥狀，少數(shù)臨床表現(xiàn)為陰道出血、腹部可觸及腫物以及壓迫癥狀等，臨床的統(tǒng)計(jì)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于實(shí)際患病率人數(shù)。子宮肌瘤的發(fā)病機(jī)制尚不明確，目前研究認(rèn)為在子宮肌瘤生長(zhǎng)過程中，依賴激素水平，雌激素和孕激素作為子宮肌瘤生長(zhǎng)的啟動(dòng)元件，主要為誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄、合成調(diào)節(jié)、分化蛋白質(zhì)，在某些生長(zhǎng)因子介導(dǎo)下促進(jìn)平滑肌細(xì)胞的有絲分裂活性，這一作用主要通過雌激素和孕激素通過靶器官內(nèi)雌激素受體(estrogen receptor，ER)和孕激素受體(progesterone receptors，PR)起作用，富半胱氨酸蛋白61(cysteine-rich 61，CYR61)具有明顯的促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂活性和趨化性，廣泛存在于人體多個(gè)器官和組織中，其眾多生物學(xué)特性在腫瘤生長(zhǎng)中有重要作用，對(duì)CYR61的研究有助于發(fā)現(xiàn)子宮肌瘤的發(fā)病機(jī)理。本研究旨在通過檢測(cè)CYR61、ER、PR在子宮全切標(biāo)本肌瘤組織中的表達(dá)并與非瘤平滑肌正常組織對(duì)比，及三者之間表達(dá)上的關(guān)系，探討三者與子宮肌瘤發(fā)生的關(guān)系，為臨床病因提供一定科學(xué)依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇筆者所在醫(yī)院2011年9月 2012年3月收治子宮肌瘤并行切除術(shù)的45例患者，年齡38~51歲，平均(44.7±2.5)歲，月經(jīng)規(guī)律，均為未絕經(jīng)婦女，術(shù)前6個(gè)月未服用任何類固醇激素類藥物，無其他疾病史，不伴有其他子宮良、惡性腫瘤，無其他內(nèi)分泌綜合征。腫瘤直徑0.5~6.8 cm，主要以單發(fā)子宮肌瘤為多數(shù)，極少數(shù)為多發(fā)性子宮肌瘤。取材術(shù)后經(jīng)病理檢驗(yàn)后證實(shí)額子宮肌瘤直徑3~5 cm，對(duì)照組取材同病例距子宮肌瘤5 em以上的正常子宮平滑肌組織。

1.2 方法

1.2.1 取材 患者術(shù)后子宮標(biāo)本一經(jīng)離體，馬上取大小各一份約1.0 cm×1.0 cm×0.5 cm子宮肌瘤中心部位及距肌瘤外5 cm的正常平滑肌組織，經(jīng)10%多聚甲醛溶液中固定48 h后，常規(guī)脫水后石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片備用，進(jìn)行免疫組織化學(xué)(SABC)法染色。

1.2.2 CYR61蛋白表達(dá)及ER、PR檢測(cè) 所有蠟塊同時(shí)進(jìn)行HE染色病例證實(shí)為子宮平滑肌瘤和子宮平滑肌組織，根據(jù)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)，CYR61供作液稀釋度為1：100，ER、PR為即用型原液，PBS為陰性對(duì)照，ER、PR的陽性對(duì)照為已知染色陽性的乳腺癌組織，CYR61的陽性對(duì)照為染色陽性大腸癌組織。檢測(cè)CYR61、ER、PR在正常子宮肌層中的表達(dá)。鏈霉素抗生物素-過氧化物酶復(fù)合物(SABC復(fù)合物)，按試劑盒(ER11302611，PR1130001，北京中山生物試劑有限公司)說明書操作。除去PBS液，滴加新鮮配置的DAB顯色溶液，顯微鏡現(xiàn)觀察3 min。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

光學(xué)顯微鏡(Olympus)下觀察三組細(xì)胞樣本的陽性情況，CYR61受體的陽性棕黃色顆粒主要位于胞漿內(nèi)，ER、PR的陽性棕黃色顆粒主要位于細(xì)胞核內(nèi)，綜合染色強(qiáng)度及分布范圍進(jìn)行半定量處理。結(jié)果判定采用免疫組織化學(xué)評(píng)分(H-score)法，依照染色輕度不同分為4級(jí)：細(xì)胞漿或細(xì)胞核上未染色為0分，棕黃色由淺到深依次列為1、2、3分，滿分為4分，隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野(×400)中進(jìn)行著色細(xì)胞和未著色細(xì)胞的數(shù)目統(tǒng)計(jì)，每個(gè)標(biāo)本計(jì)數(shù)1 000個(gè)細(xì)胞，分布范圍評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：陽性細(xì)胞＜10%計(jì)為0分；10%~30%為1分；31%~60%為2分，>60%為3分；上述兩種評(píng)分相加：(-)0~1分；(+)2分；(++)3~4分；(+++)5~6分。陽性率=(陽性例數(shù)/總例數(shù))×100% 。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)分析，兩組等級(jí)資料采用Wann-whitney檢驗(yàn)進(jìn)行比較，采用Spearman進(jìn)行等級(jí)相關(guān)性分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

依據(jù)CYR61受體的陽性棕黃色顆粒主要位于胞漿內(nèi)，ER、PR的陽性棕黃色顆粒主要位于細(xì)胞核內(nèi)，陽性表達(dá)強(qiáng)弱依次為：(+++)強(qiáng)陽性，(++)陽性，(+)弱陽性，(-)陰性。分別將實(shí)驗(yàn)組CYR61、ER、PR在宮肌瘤和相應(yīng)肌層的表達(dá)陽性率與對(duì)照組對(duì)比得出：ER在實(shí)驗(yàn)組陽性率明顯高于對(duì)照組，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜ 0.01)，見表1。PR在實(shí)驗(yàn)組陽性率明顯高于對(duì)照組，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見表2。CYR61在實(shí)驗(yàn)組陽性率明顯低于對(duì)照組，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見表3。

3 討論

近年來，隨著分子生物學(xué)研究的發(fā)展，許多相關(guān)研究指出，子宮肌瘤的發(fā)生于遺傳因素有關(guān)，細(xì)胞遺傳學(xué)顯示20%~50% 的子宮肌瘤存在遺傳異常，分子生物學(xué)研究顯示子宮肌瘤由單克隆平滑肌細(xì)胞增殖而成，多發(fā)性子宮肌瘤由不同克隆細(xì)胞形成。近年來各國(guó)臨床上對(duì)雌、孕激素與子宮肌瘤生長(zhǎng)之間的關(guān)系研究不斷深入，提示子宮肌瘤是激素水平依賴性腫瘤，需要兩種激素共同協(xié)同作用生長(zhǎng)，雌激素首先與ER受體結(jié)合，誘導(dǎo)肌瘤細(xì)胞表皮生長(zhǎng)因子EGF-R的表達(dá)，促進(jìn)PCNA表達(dá)；孕激素也同樣先與PR結(jié)合，誘導(dǎo)肌瘤細(xì)胞產(chǎn)生大量上皮生長(zhǎng)因子EGF樣蛋白，促進(jìn)細(xì)胞增殖。CYR61是CCN基因家族中最新發(fā)現(xiàn)的一員，家族成員結(jié)構(gòu)相似，均含有富半胱氨酸，編碼CYR61蛋白，利用自身明顯促細(xì)胞分裂活性的特征，通過促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、血管形成和維持腫瘤體供血來影響腫瘤的發(fā)生于發(fā)展。CYR61基因與細(xì)胞間的通訊有密切關(guān)系，人類的CYR61基因表達(dá)下調(diào)可能是腫瘤發(fā)生的一個(gè)重要原因。

本研究結(jié)果顯示，45例實(shí)驗(yàn)患者的子宮肌瘤中ER和PR的水平均顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)，ER在子宮肌瘤和相應(yīng)肌層的表達(dá)陽性率高達(dá)95.56%，PR在子宮肌瘤和相應(yīng)肌層的表達(dá)陽性率高達(dá)97.78%，符合包玲燕等的報(bào)道結(jié)果。PR的表達(dá)高于ER，當(dāng)子宮肌瘤細(xì)胞內(nèi)ER異常性增多時(shí)可顯著增加子宮肌瘤組織對(duì)雌激素的親和力，肌瘤細(xì)胞顯著增生，臨床上的抗激素藥物通過與ER配體結(jié)合區(qū)結(jié)合后阻止雌激素的這種作用，最終達(dá)到治療的目的。測(cè)得子宮肌瘤組織中ER和PR表達(dá)說明良性子宮肌瘤相當(dāng)完整保留了正常子宮肌瘤組織中ER和PR的特性，子宮肌瘤的發(fā)生發(fā)展與雌孕激素水平關(guān)系密切。本研究中CYR61在子宮肌瘤和相應(yīng)肌層中都有表達(dá)，但其在正常子宮肌瘤組織中的表達(dá)高于在肌瘤組織中的表達(dá)，但陽性率程度明顯低于ER和PR的水平，提示CYR61可能與子宮肌瘤發(fā)病有關(guān)，肌瘤組織中的陽性率的減弱，可能是其通過抑制肌瘤細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞過度增殖。本研究中，子宮肌細(xì)胞和肌瘤細(xì)胞中CYR61的表達(dá)與ER、PR之間的相關(guān)陛不明確，及細(xì)胞內(nèi)的早期雌激素可以上調(diào)CYR61的表達(dá)，但本研究的標(biāo)本不區(qū)分增殖期和分泌期，因而未檢測(cè)到三者之間的調(diào)節(jié)作用關(guān)系。

子宮肌瘤的發(fā)病是多因素的，目前的臨床治療主要以手術(shù)切除為主，藥物治療因副作用大、停藥后復(fù)發(fā)率高而受限，通過對(duì)CYR61、ER和PR在子宮肌瘤組織和正常平滑肌組織中表達(dá)水平及三者間相互作用的研究，為病情的發(fā)展發(fā)生提供科學(xué)依據(jù)，更好地預(yù)防子宮肌瘤的發(fā)生，對(duì)患者術(shù)后處理提供一定幫助，為應(yīng)用新方法治療和控制病情發(fā)展展示新的思路。

(賈婉秋，富半胱氨酸蛋白61與雌激素受體、孕激素受體在子宮肌瘤中的表達(dá)差異[J]中國(guó)醫(yī)藥科學(xué)2012年7月第2卷第13期：35、36、40)

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