方法: 運用MTT法研究靈芝孢子粉水溶性成份在體外對HepG2細胞的抑制作用, 并利用裸小鼠的移植瘤模型研究靈芝孢子粉在體內對HepG2細胞的生長抑制作用. HE染色觀察肝癌組織結構和細胞形態(tài)改變。 

    結果: TMTT實驗結果表明靈芝孢子粉對HepG2細胞的IC50值隨作用時間增加而減小,72 h達到最低, 為2.14 g/L. 體內抑瘤實驗結果顯示靈芝孢子粉為2000mg/kg時, 對裸小鼠移植瘤的抑制率為57.0%. 鏡下觀察靈芝孢子粉治療組腫瘤壞死組織較多, 細胞異型性較小。 

    結論: 高濃度及高劑量的靈芝孢子粉具有抑制腫瘤細胞生長的作用。 

    背景資料：靈芝是擔子菌綱多孔科靈芝屬真菌, 公認為扶正固本, 滋補強壯的傳統(tǒng)中藥. 臨床報道孢子粉可改善機體的免疫功能, 防治癌癥, 減輕患者對放、化療的不良反應。 

    靈芝是擔子菌綱多孔科靈芝屬真菌, 其生長成熟后所散發(fā)出來的孢子體即靈芝孢子粉。 靈芝孢子粉富含多糖肽, 有機鍺, 多種氨基酸, 脂肪酸及微量元素等成份. 臨床報道孢子粉可改善機體的免疫功能, 防治癌癥, 減輕患者對放、化
療的不良反應。 以往藥理研究表明, 靈芝孢子粉可增強免疫功能, 并對多種移植性動物腫瘤有明顯的抑制作用[1-3]. 但靈芝孢子粉對體外培養(yǎng)人癌細胞的直接作用及人癌裸鼠移植瘤治療作用的研究則較少. 本文報道靈芝孢子粉體外對
人肝癌細胞株HepG2生長的抑制作用及對裸小鼠人HepG2移植瘤的抗腫瘤作用的研究。 

    1 材料和方法 

    1.1 材料 HepG2為人肝癌細胞株 

    1.2 方法 

    1.2.1 體外細胞毒實驗(MTT法) 

    1.2.2 體內抑瘤實驗(人肝癌細胞HepG2裸鼠移植瘤的生長抑制實驗): 取對數生長期的人肝癌HepG2細胞, 2.5 g/L胰酶消化后, 用無血清DMEM配成1×1010 cell/L的單細胞懸液. 在無菌條件下接種于裸鼠腋窩皮下, 0.2 mL/只(相當于每只裸鼠接種2×106個腫瘤細胞)[5]. 接種1 wk后可見腫瘤生長, 當腫瘤大小到直徑約為3-4 mm時(接種10 d以后), 將荷瘤裸鼠按腫瘤大小隨機分為3組, 每組7-8只裸鼠, 雌雄兼有, (1)空白組:生理鹽水100 mL/kg, ig, 每日給藥; (2)陽性對照組: 5-FU, 用生理鹽水稀釋, 無菌分裝, 20 mg/kg,i p, 隔日給藥; (3)給藥組: 靈芝孢子粉B, 5 g/LCMC-Na配制, 高壓滅菌, 2000 mg/kg, ig, 每日給藥。 共給藥21 d. 自接種后每日測量裸鼠體質量,每周用游標卡尺測量裸鼠腫瘤的長(a)短(b)徑,并按以下公式計算相對體積. V = 0.5ab2, 各組按時間點的平均瘤體積作生長曲線圖. 末次給藥后24 h時處死動物, 剝離腫瘤稱質量. 做大體和病理觀察, 部分腫瘤組織用40 g/L多聚甲醛固定,石蠟包埋, 連續(xù)4 μm切片, HE染色, 光鏡下觀察肝癌細胞壞死, 形態(tài)改變情況。計算各組抑瘤率,抑瘤率 = (1-用藥組平均瘤質量/空白組平均瘤質量)×100%, 實驗重復兩次。統(tǒng)計學處理 用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進行分析, 結果以mean±SD表示, 用One-Way ANOVA和t -test進行分析. 給藥組組間比較用LSD法。 

    2 結果 

    靈芝孢子粉水溶性成份對HepG2細胞的作用 靈芝孢子粉水溶性成份對HepG2細胞具有明顯的抑制作用, 隨著時間延長和劑量的增加, 對研發(fā)前沿藥理研究表明, 靈芝孢子粉可增強免疫功能, 并對多種移植性動物腫瘤有明顯的抑制
作用。

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