幽門螺桿菌(helicobacter pylori,Hp)感染是人類最常見的慢性感染之一,估計全球Hp感染人數超過50%[1]。Hp是一種定植于人胃黏膜并引起多種胃、十二指腸疾病的革蘭陰性細菌。Hp的致病因素包括內毒素、空泡毒素、粘附素和Cag毒力島編碼的一些基因產物[2,3]。Hp感染是慢性
胃炎及
消化性潰瘍的主要原因,在慢性活動性胃炎患者活檢標本中Hp檢出率達90%[4],在消化性潰瘍患者活檢標本中Hp檢出率可達100%[5]。因此,慢性胃炎患者胃黏膜標本中Hp的檢查,對Hp感染進行根治性治療、徹底治愈胃炎和消化性潰瘍有著重要的臨床意義。
1 資料與方法
1.1 病例的選擇 胃組織標本來自2003年2月~2004年8月在吉林大學中日聯誼醫院消化內科就診,經胃鏡活檢快速尿素酶試驗陽性的195例慢性胃病患者。在留取標本的當天采取外周血分別檢測Hp-IgG抗體和Hp-CagA抗體。所有患者在胃鏡檢查前30天內未服用鉍制劑、質子泵制劑、抗菌藥及甾體類抗炎藥物,亦無心、肝、肺、腎等重要臟器疾患。
1.2 血清Hp-IgG抗體及Hp-CagA抗體的檢測 空腹靜脈血3ml,常溫下分離血清-20℃保存。采用ELISA法檢測Hp-IgG抗體及Hp-CagA抗體。試劑盒由上海生物工程公司提供。
1.3 Hp的分離培養鑒定 胃竇部及胃體部組織標本證實尿素酶陽性的前提下,胃竇部距幽門2~3cm處胃體小彎處分別鉗取黏膜組織,置無菌生理鹽水中4℃保存,在4h內接種SKirrow S選擇性培養基中,置厭氧罐內,緩慢注入混合氣體(5%O2、10%CO2、85%N2),37℃培養連續5天觀察結果。Hp的鑒定依據主要包括:革蘭染色陰性,外觀呈S或弧形,生化反應結果為尿素酶試驗陽性、觸酶試驗陽性和氧化酶試驗陽性。
1.4 最低抑菌濃度的測定 采用平皿二倍稀釋法檢測接種細菌對抗生素的最低抑菌濃度。具體方法和藥敏判斷按NCCLS2000年的規定。標準菌株:幽門螺桿菌NCTC11637(CagA陽性)作為質控菌株?股兀杭紫踹、替硝唑、克拉霉素、阿莫西林、紅霉素、呋喃唑酮、四環素。
2 結果
2.1 不同慢性胃病患者幽門螺桿菌分離鑒定結果 在不同類型的慢性胃病患者的胃黏膜標本中Hp的分離培養呈現較高的陽性率,且不同慢性胃病患者Hp的陽性率差異無顯著性(P>0.05),見表1。表1 不同慢性胃病患者Hp分離培養結果
2.2 不同慢性胃病患者血清Hp-IgG抗體與Hp培養陽性率的關系 在195例慢性胃病患者中,165例呈現Hp-IgG抗體陽性。其Hp的陽性率達88.0%。而Hp-IgG抗體陰性患者,其Hp的陽性率僅為33.3%,兩者差異有顯著性(P<0.01),見表2。表2 血清Hp-IgG抗體與Hp培養陽性率的關系
2.3 不同慢性胃病患者血清Hp-CagA抗體與Hp培養陽性率的關系 在195例慢性胃病患者中,血清Hp-CagA抗體陽性為125例,其Hp的陽性率為84.4%。而Hp-CagA抗體陰性患者,其Hp的陽性率為62.5%。見表3。 表3 血清Hp-CagA抗體與Hp培養陽性率的關系
2.4 195株Hp分離株藥敏試驗結果 阿莫西林、克拉霉素、四環素及呋喃唑酮對Hp顯示了較強的抗菌活性,紅霉素較次之,甲硝唑及替硝唑對Hp的敏感性較低。見表4。表4 7種抗生素對195株Hp的藥敏結果
3 討論
Hp是革蘭染色陰性的微需氧細菌,是慢性胃炎及消化性潰瘍的主要病因。該項研究對195例快速尿素酶試驗陽性的慢性胃病患者進行了分離培養,結果符合Hp判定標準的菌株共155株,陽性率達到79.5%。這與歐美等發達國家在90%以上的培養陽性率相比還有一定的差距,分析原因可能是在技術及方法的成熟方面相對比較落后。在比較不同胃病Hp培養陽性率發現,各種類型的慢性胃病之間無明顯差異。說明Hp是引起慢性胃病不可忽視的重要因素。
目前應用于Hp診斷方法有很多種。我國1999年制定的診斷標準分為科研診斷標準及臨床診斷標準?蒲性\斷標準要求形態學、尿素酶依賴性試驗、血清學試驗及特異性PCR四項中的任意兩項或Hp培養陽性即可確診。該項工作采用了Hp分離培養和血清學檢測。結果表明,在Hp培養陽性的基礎上,Hp-IgG抗體和Hp-CagA抗體都呈現了較高的陽性率,但單純一項的血清學檢測結果仍有陰性結果。分析原因一方面不能排除患者由于免疫力較低的因素,不能有效地產生抗體,另一方面也不能排除技術操作方面的偏差。因此,筆者認為在分離培養Hp的基礎上,結合這兩種血清學檢測指標,以提高診斷的正確性。
隨著抗生素在Hp根除治療中的應用,Hp的耐藥株也有陸續的報道,直接影響了Hp的根除效果,也是導致抗感染失敗的重要原因。由于抗生素在體內易受胃內pH影響而失去活性,硝基咪唑類藥物在胃內不受pH影響,已經成為治療Hp感染的重要藥物。阿莫西林及克拉霉素在胃內受pH影響較少,是根除Hp感染的重要藥物,對195株Hp進行藥敏分析發現,甲硝唑的MIC50已超過125μg/ml,說明敏感性很差,替硝唑的MIC50也已達到64μg/ml,敏感性亦不理想。這與國內的相關報道一致?死顾厥悄壳翱股刂袑τ拈T螺桿菌作用最強的藥物之一,該藥敏試驗也說明在分離的95株Hp中,克拉霉素是Hp感染根除治療的首選藥物。盡管四環素和呋喃唑酮目前在臨床已經很少應用,但藥敏結果提示可以作為根除Hp感染的輔助療法。(參考來源:慢性胃炎、消化性潰瘍患者幽門螺旋桿菌的分離鑒定和耐藥性分析,張學英,中華醫學實踐雜志2006年第5卷第7期)