孫波 徐雨

（中國藥物與臨床2012年7月第12卷第7期：944-945）

 

真皮乳頭毛細血管增生、擴張是銀屑病的重要病理改變之一，與銀屑病的發生、持續存在及復發密切相關，但其機制至今尚未完全闡明。本研究采用免疫組織化學方法檢測與血管生成相關的存活素（Survivin）及血管內皮生長因子（vasclar endothelial growth factor，VEGF）在尋常型銀屑病皮損中的表達，以期探討兩者在其發病中的作用及意義。

 

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 標本來源：尋常型銀屑病患者30例.均為門診患者，男性18例，女性12例；年齡20~57歲，平均34.5歲；病程3個月至15年，平均4.8年；取材部位為軀干、四肢部位皮損，其中軀干17例，四肢13例。所有患者均處于進行期，并經病理確診，且未服用過類固醇激素、免疫抑制劑及維A酸類藥物。取材前2周內未使用藥物治療，同時排除伴有其他系統性疾病的病例。30例正常皮膚組織，男性17例，女性13例；取自整形外科手術切除的軀干、四肢部位皮膚，軀干15例，四肢15例；年齡18~55歲，平均33.7歲。2組間性別和年齡及取材部位差異無統計學意義。

 

1.1.2 主要儀器及試劑：石蠟切片機為德國Leica公司產品，倒置光學顯微鏡為Olympus公司產品；兔抗人Survivin多克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術有限公司、兔抗人VEGF多克隆抗體、SABC免疫組織化學試劑盒、二氨基聯苯胺（DAB）顯色劑均購自武漢博士德生物有限公司。

 

1.2 方法

1.2.1 標本處理：所有標本均在局部麻醉下手術獲取。標本取材后立即置于中性甲醛固定液中固定，按組織病理技術常規行脫水并行石蠟包埋。切片機切為4 μm厚切片，置58℃烤箱2 h備用。

 

1.2.2 免疫組織化學：嚴格按試劑盒說明進行操作，一抗Survivin多克隆抗體和VEGF多克隆抗體濃度均為1：100，以磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作為陰性對照，用已知陽性切片做陽性對照。

 

1.2.3 結果判定及分析：顯微鏡下觀察以胞質和（或）胞膜呈棕黃色為陽性細胞。將免疫組織化學染色結果進行顯微照相，每張切片隨機選取5個視野，用MIAS-2000圖像分析系統對結果進行定量分析，測定陽性區域積分吸光度值（A），取其平均值，以此來反應該標本的表達強度。

 

1.3 統計學方法

計量資料以x(-)±s表示，用SPSS 13.0統計軟件進行統計分析。組間比較采用t檢驗，相關性分析用Pearson相關分析。檢驗水準α=0.05。

 

2 結 果

2.1 Survivin表達：Survivin表達定位于胞質，銀屑病組在除角質層外的角質形成細胞各層及乳頭層血管內皮細胞均呈不同程度陽性表達（A值為13.5±1.2），而在健康對照組則呈陰性表達（A值為9.0±0.9）。2組比較差異有統計學意義（t=15.989，P＜0.01）。

 

2.2 VEGF表達：VEGF表達定位于胞質，銀屑病組主要表達于棘層及乳頭層血管內皮細胞（A值為14.2±1.2），而健康對照組僅在基底層有少量表達或陰性表達（ 值為9.4±1.1）。2組比較差異有統計學意義（t=16.341，P＜0.01）。

 

2.3 相關性分析：經Pearson相關分析，VEGF與Survivin的表達呈正相關（r：0.623，P＜0.01）。

 

3 討 論

VEGF是一種重要的皮膚血管生成因子，由角質形成細胞分泌，通過與其內皮細胞上的特異性受體結合發揮促進毛細血管增殖、誘導毛細血管芽生、促進內皮細胞分裂、增殖和抑制凋亡等多種功能。在生理性和病理性血管生成過程中起關鍵作用。李勇堅等研究顯示銀屑病皮損中存在VEGF的高表達，且與其血管生成密切相關。本實驗結果顯示，在健康人皮膚中，VEGF僅在基底層有少量表達，而在進行期的尋常型銀屑病皮損中，除角質層外的角質形成細胞各層及血管內皮細胞等呈陽性表達，2組比較，差異有統計學意義。這表明，高表達的VEGF參與了銀屑病的發病，其促血管生成作用可能是銀屑病血管增生、擴張的主要原因。

 

Survivin是凋亡抑制蛋白家族的成員，是迄今為止發現的最強的凋亡抑制因子。近年來逐漸發現，Survivin除表達于多種腫瘤組織外還表達于具有角質形成細胞增殖的疾病中。如單純性苔蘚、脂溢性皮炎、尋常疣等。以往研究顯示，Survivin的高表達與銀屑病角質形成細胞的病理性增生及淋巴細胞、單核細胞等的持續活化和浸潤有關。本實驗中發現，Survivin在進行期尋常型銀屑病皮損中呈陽性表達。主要表達在角質形成細胞各層及血管內皮細胞中。而在正常皮膚組織中僅有基底層的弱表達或不表達。兩者比較差異有統計學意義，與國外研究結果一致。以上結果表明，Survivin的高表達在銀屑病的發病中發揮著一定的作用，它不僅與銀屑病角質形成細胞的異常及炎細胞浸潤有關，而且可能與乳頭層毛細血管增生、擴張密切相關。

 

本實驗中發現，VEGF和Survivin在尋常型銀屑病皮損中呈陽性表達.且兩者表達呈正相關，表明兩者在銀屑病皮損血管異常改變中可能發揮著協同作用。

 

總之，Survivin及VEGF通過不同方面參與了尋常型銀屑病的發病，本研究證實了兩者在進行期尋常型銀屑病發病中的作用及相關性，而兩者在不同類型銀屑病及尋常型銀屑病不同分期中的表達還需進一步研究。

 

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