骨質(zhì)疏松癥是一種以骨強度受損為特征的骨骼疾病。其病因很多,最終結(jié)果為成骨過程低于破骨過程,骨量和骨質(zhì)量下降。成骨細胞是骨質(zhì)生發(fā)、形成的物質(zhì)基礎(chǔ),只有其不斷的分裂增殖才可以產(chǎn)生豐富的膠原基質(zhì),通過礦化作用形成更多骨質(zhì)。金天格膠囊的主要成份為人工虎骨粉。本研究觀察金天格膠囊對成骨細胞的影響,探討其對成骨細胞作用的機理。
主要研究方向:骨質(zhì)疏松的診斷與治療,的MEM 培養(yǎng)液重懸細胞,接種于75cm~75cm培養(yǎng)瓶,于37℃,25%CO 條件下培養(yǎng),次日換液棄去懸浮細胞,每隔兩日換液1次;消化后的骨碎片可貼于25cm~25cm培養(yǎng)瓶壁(25—40個碎骨粒/瓶),加入含15% PBS的MEM 培養(yǎng)液,37~C,25%CO 條件下培養(yǎng),l周后換液,以后隔兩日換液1次,即得到酶消化法及骨片貼附法所獲得的人成骨樣細胞(HOB)。
應(yīng)用金天格膠囊(金花企業(yè)股份有限公司高新制藥廠生產(chǎn))lg,加入含l5%PBS的MEM培養(yǎng)液(pH值為7.3.7.4,過濾除菌)lOml中,用0.451~m濾器除菌,配成濃度為0.1g/ml的溶液。依上法可配制成濃度為5p~g/ml、10l~g/ml、20~g/ml的金天格膠囊藥液。
將處于生長旺盛的人成骨樣細胞(HOB),接種于25cm~25cm培養(yǎng)瓶(第2代),用無酚紅MEM 培養(yǎng)液(含15%PBS、VitC50~g/ml、青霉素50U/ml、慶大霉素50~g/m1)培養(yǎng),取細胞
懸液加到24孔板上,每孔lml。放人37~C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細胞貼壁后,第2天加入配好的金天格膠囊藥液。
統(tǒng)計方法:定量指標(biāo)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用x 檢驗或t檢驗,P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
金天格膠囊藥液可以明顯刺激成骨細胞的增殖,與不用藥組對比有顯著差異,并隨藥物濃度的增加,成骨細胞數(shù)明顯增多(P<0.05);反映成骨細胞活性的AKP、BGP隨藥物濃度的增加也相應(yīng)升高,與不用藥組對比有顯著差異(P<0.05);反映破骨細胞活性的PYD則隨藥物濃度的增加而相應(yīng)下降,與不用藥組對比有顯著差異(P<0.05 o
成骨細胞是參與骨代謝的重要細胞,它與破骨細胞共同維持著骨代謝重建的平衡。骨質(zhì)疏松發(fā)生的機理是骨形成落后于骨溶解,在骨的重建過程中無法完全修復(fù)破壞的骨質(zhì),使其骨量不斷減少、骨質(zhì)量下降。因此,治療骨質(zhì)疏松的關(guān)鍵是促進成骨細胞的成骨過程,緩解破骨細胞的破骨過程。本研究成功培養(yǎng)出HOB。堿性磷酸酶染色陽性細胞計數(shù)可直接代表該細胞群的數(shù)量與純度。
本研究聯(lián)合檢測金天格膠囊藥液干預(yù)試驗后的AKP、BGP、PYD的含量并進行細胞計數(shù),結(jié)果表明加藥后細胞數(shù)隨藥物濃度增加而增加,AKP、BGP水平也相應(yīng)提高,Ⅲ組的AKP、BGP水平較I組和II組增加明顯,與不用藥組對比存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),說明金天格膠囊有直接刺激成骨細胞增殖及加強其活性的作用,并且提高金天格膠囊的濃度(用量)有利于藥效的發(fā)揮。再者,標(biāo)本檢測中發(fā)現(xiàn)的PYD,可能是成骨細胞傳代過程中部分細胞破壞,釋放某種物質(zhì)降解膠原產(chǎn)生的,本研究顯示加大金天格膠囊藥液的濃度可使培養(yǎng)液中PYD的濃度下降(P<0.05),這說明金天格膠囊也有抑制破骨的作用。
(本文節(jié)選自《金天格膠囊對成骨細胞作用的研究》)