攜帶IFN-5α基因的HBV DNA質粒構建及其表達

來源：新特藥房藥訊作者：新特藥房瀏覽：發布時間：2005/9/22 10:11:00

（上海）為了構建攜帶人IFN-5α基因的X基因缺陷的HBV DNA真核表達質粒，并在真核細胞中表達，研究者在pBR322-B-HBV質粒(含adrⅠ型HBV DNA)中插入人工合成片段破壞其HBV-X基因區，再與IFN-5α片段連接，最后克隆人真核表達載體pcDNA3，獲得攜帶人IFN-5α基因的X基因缺陷的HBV DNA真核表達質粒pcDNA3-KN-F1F2-IFN-5α。同時構建兩組對照質粒，即連接完整HBV DNA的真核表達質粒和連接X基因缺陷的HBV DNA真核表達質粒，將上述3種質粒以脂質體法同時轉染HepG2細胞，G418篩選出穩定表達系統后選用熒光定量PCR法、ELISA法、RT-PCR法檢測3種包裝病毒的復制表達以及IFN-5α的表達水平。結果獲得目的真核表達質粒pcDNA3-KN-F1F2-IFN-5α；目的質粒轉染HepG2細胞后其包裝病毒的復制表達水平均較兩個對照組降低；插入的IFN-5α片段可以在mRNA以及蛋白質水平表達。可見成功構建攜帶人IFN-5α基因的X基因缺陷的HBV DNA真核表達質粒，并能在HepG2真核細胞中表達。

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