迄今為止，對(duì)彈力蛋白酶是否參與肝纖維化的形成與降解過程知之甚少。細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的彈力纖維隨著肝纖維化的進(jìn)展逐漸增加[1]。我們?cè)鴪?bào)道正常大鼠肝細(xì)胞、肝竇壁內(nèi)皮細(xì)胞等均有彈力蛋白酶mRNA表達(dá)[2]。本研究進(jìn)一步觀察了彈力蛋白酶在肝纖維化組織中的表達(dá)以及抗肝纖維化藥扶正化瘀方對(duì)彈力蛋白酶表達(dá)的影響。
　　

    一、材料與方法
　　1. 肝纖維化動(dòng)物模型及扶正化瘀方制備：Wistar雄性大鼠，140～160g，造模方法詳見文獻(xiàn)[3]。扶正化瘀方藥物組成同國家三類新藥扶正化瘀膠囊（國藥準(zhǔn)字號(hào)20020073），配制成含生藥0.369g/ml的混懸液。
　　2. 彈力蛋白酶Ⅱ探針制備及原位雜交：以大鼠胰腺絲氨酸彈力蛋白酶ⅡmRNA堿基排列中第271～288與第776～795之間的核苷酸作為引物，制成地高辛素標(biāo)記的RNA探針進(jìn)行原位雜交，具體方法參見文獻(xiàn)[2, 4，5]。
　　3. 胰腺彈力蛋白酶蛋白印跡雜交及其活性測(cè)定：肝組織總蛋白30μg以10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳后轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜，兔抗豬彈力蛋白酶抗體反應(yīng)。活性測(cè)定方法參見文獻(xiàn)[6]。
　　4. 其他：Jamall氏法測(cè)定肝組織羥脯氨酸（hydrox-yproline, Hyp）；維多利亞藍(lán)染色法行彈力纖維染色；天狼星紅染色法行膠原纖維染色。膠原纖維增生程度按文獻(xiàn)[7]方法進(jìn)行分期半定量判斷。
　　5. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，計(jì)數(shù)資料用Radit分析。
　　

    二、結(jié)果（略）
　　

    三、討論
　　肝組織Hyp含量、肝組織病理學(xué)、肝功能及大體病理均表明二甲基亞硝胺可制備大鼠肝纖維化模型。由于使用正義探針原位雜交呈陰性反應(yīng)，證明所制備的反義探針是成功的[2]。本研究進(jìn)一步證實(shí)在正常大鼠肝組織中，不僅有彈力蛋白酶mRNA表達(dá)[2]，同時(shí)有彈力蛋白酶蛋白及其活性表達(dá)。
　　肝纖維化模型大鼠肝組織彈力纖維、膠原纖維及Hyp含量均有明顯增加，與此同時(shí)，假小葉內(nèi)肝細(xì)胞的彈力蛋白酶的mRNA表達(dá)及肝組織中的彈力蛋白酶活性有所減少。提示二甲基亞硝胺通過抑制彈力蛋白酶表達(dá)，破壞了ECM合成與降解的動(dòng)態(tài)平衡，導(dǎo)致ECM代謝過程中合成大于降解，從而促進(jìn)了肝纖維化的形成。由于扶正化瘀方組大鼠肝組織彈力蛋白酶mRNA及其活性表達(dá)介于正常組與模型組之間，其肝纖維化程度也居于上述兩組之間，提示扶正化瘀方藥物也許通過上調(diào)彈力蛋白酶表達(dá)促進(jìn)了肝纖維化的降解，從而在某種程度上阻止了肝纖維化的進(jìn)一步形成。彈力蛋白酶mRNA、蛋白及其活性在各組間的表達(dá)強(qiáng)度基本一致、并與各組肝纖維化的程度呈反比關(guān)系，據(jù)此可以初步認(rèn)為彈力蛋白酶是保持ECM代謝動(dòng)態(tài)平衡的因素之一，參與了肝纖維化形成與降解的代謝過程。
既往研究表明，扶正化瘀方抗肝纖維化的作用機(jī)制主要有拮抗肝星狀細(xì)胞的活化、影響膠原代謝酶活性以促進(jìn)膠原降解，同時(shí)具有抗肝竇毛細(xì)血管化、抗肝損傷、保護(hù)肝細(xì)胞的作用[8]。肝星狀細(xì)胞表達(dá)彈力蛋白的功能優(yōu)于肝細(xì)胞[9]，據(jù)此可推測(cè)扶正化瘀方通過拮抗肝星狀細(xì)胞的活化，在影響膠原纖維代謝的同時(shí)，也影響了彈力纖維的代謝，使得金屬蛋白酶與絲氨酸彈力蛋白酶協(xié)同作用，抑制了肝纖維化的進(jìn)展。
　　本研究初步證實(shí)彈力蛋白酶在一定程度上參與了肝纖維化形成與降解的代謝過程，扶正化瘀方通過上調(diào)彈力蛋白酶表達(dá)可在某種程度上抑制肝纖維化的進(jìn)一步形成。

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