【摘要】目的：研制與上市品具有相似體外溶出的復(fù)方纈沙坦/苯磺酸氨氯地平片。方法：用濕法制粒壓片工藝制備自制品，通過單因素試驗初步篩選處方，中心復(fù)合設(shè)計優(yōu)化處方。比較不同pH溶出介質(zhì)（pH 1.2鹽酸、pH4.5乙酸緩沖液和0.1%聚山梨酯80-pH 6.8磷酸緩沖液）中自制品與市售復(fù)方片的溶出行為，通過相似因子f 2計算，評價2種藥物體外溶出的相似性。結(jié)果：與市售片比較，以優(yōu)化處方制備的復(fù)方片中纈沙坦和苯磺酸氨氯地平在不同pH 值溶出介質(zhì)中的溶出度相似因子f 2均＞50。結(jié)論：自制的復(fù)方片與市售片體外溶出行為相似。
 

    纈沙坦（valsartan）是一種新的抗高血壓藥物，屬于血管緊張素II 受體拮抗劑（ARB）。通過對腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAS系統(tǒng)）特異性阻斷來實現(xiàn)控制血壓的效果。研究顯示，纈沙坦的人體生物利用度約30%，達(dá)到血漿高峰濃度時間是2 h，清除半衰期7 h。血漿蛋白結(jié)合率85%~99%，人的穩(wěn)態(tài)分布容積約為17 L，以原形排泄，其中膽汁排泄70%，腎臟排泄30%。該藥還具有長效、高效、低毒等特點，為臨床高血壓的治療提供了一種新藥。苯磺酸氨氯地平（amlodipine besylate）屬于鈣通道阻滯劑（CCB），主要是通過阻滯心肌和血管平滑肌細(xì)胞外的鈣離子通道，發(fā)揮抗高血壓及抗心絞痛作用。

    兩者的復(fù)方片劑（Exforge，倍博特®）是全球第一個ARB/CCB單片復(fù)方制劑，由瑞士諾華公司（Novartis Pharma Schweiz AG）研發(fā)。2007年6月Exforge 獲美國FDA批準(zhǔn)上市，2009年9 月被SFDA批準(zhǔn)在中國上市。倍博特®的制備工藝是干法制粒壓片，諾華公司在中國申請的相關(guān)制備方法專利已公開，海南錦瑞公司申請的直接壓片以及浙江華海公司申請的干法制粒工藝均獲授權(quán)。本研究采用濕法制粒壓片工藝制備與倍博特®具有相似溶出行為的復(fù)方纈沙坦苯磺酸氨氯地平片。

    材料 
    ZRS-8G 智能溶出儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）；TDP單沖壓片機（上海天祥健臺制藥機械有限公司）；YPD-300D 片劑硬度儀（上海黃海藥檢儀器有限公司）；LC- 0AT 效液相色譜儀（日本島津公司）；MA35水分測定儀（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；FT-2000AE脆碎度儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）；BY300A小型包衣鍋（上海黃海藥檢儀器廠）。

    苯磺酸氨氯地平原料（福州辰星藥業(yè)有限公司，批號：20100614）；纈沙坦原料（福州辰星藥業(yè)有限公司，批號：20100523）；苯磺酸氨氯地平對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100374-200903，HPLC含量為99.4%）；纈沙坦對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100651-200902，HPLC含量為98.9%）。羧甲基淀粉鈉（CMS-Na，安徽山河藥用輔料有限公司）；預(yù)膠化淀粉（安徽山河藥用輔料有限公司）；聚維酮（PVP-K30，International Specialty Products Inc.）；微粉硅膠（安徽山河藥用輔料有限公司）；硬脂酸鎂（安徽山河藥用輔料有限公司）；包衣粉（歐巴代®295B620003，上海卡樂康包衣技術(shù)有限公司）；乙腈（色譜純，山東禹王實業(yè)有限公司）；甲醇（色譜純江蘇漢邦科技有限公司）；其余試劑均為市售分析純；純化水（實驗室自制）。

    方法 
    1 處方和工藝單因素篩選 
    參考相同品種專利中公開的制備工藝與處方組成，固定纈沙坦和苯磺酸氨氯地平主藥量分別為片重的47.9%和4.16%，進(jìn)行濕法制粒壓片處方與工藝的初步篩選。 
    1.1 填充劑的篩選 
    分別以片重32.4%的微晶纖維素（CC101）、預(yù)膠化淀粉、乳糖為填充劑，考察填充劑對2種藥物溶出的影響。 
    1.2 崩解劑的篩選 
    分別以12%的交聯(lián)聚維酮（PVPP）、羧甲基纖維素鈉（CCNa）、低取代羥丙基（L-HPC）、羧甲基淀粉鈉（CMS-Na）為崩解劑，全部內(nèi)加，考察崩解劑對2種藥物溶出的影響。 
    1.3 黏合劑的篩選 
    分別以10%淀粉漿、3% PVP-K30水溶液、3%HPMC E5以及3% PVP-K30的70%醇溶液適量為黏合劑，考察黏合劑種類對2種藥物溶出的影響；在確定了黏合劑種類后，考察黏合劑用量對2種藥物溶出的影響。 
    1.4 潤滑劑和助流劑的篩選 
    考察加與不加0.9%微粉硅膠對2種藥物溶出的影響。以0.9%~2.7%硬脂酸鎂為潤滑劑，考察不同加入方式（內(nèi)加、外加、內(nèi)外加）對2種藥物溶出的影響。 
    1.5 烘干時間和溫度對水分的影響 
    采用不同的黏合劑得到的顆粒分別放置于40 ℃和60 ℃下烘干，40 ℃于2，4，6，19 h以及60 ℃于2，4，5h取樣2g，利用水分測定儀，考察2種溫度使顆粒水分低于3%需要的時間。

    2 復(fù)方片制備工藝 
    將苯磺酸氨氯地平與等量的崩解劑混合；將助流劑與等量的纈沙坦混合，再與剩余量崩解劑混合；將上述兩者混合后，采用等量遞加與剩余量纈沙坦、填充劑過80 目篩混合3遍，制軟材，20目篩制粒，60 ℃烘干2~4 h，18目篩整粒，與處方量潤滑劑混合均勻，壓片，即得素片。
將卡樂康歐巴代（黃色）薄膜包衣材料8 g在高速分散器的作用下（5000 r•min-1，5 min）緩慢加入到100 mL水中直至分散均勻（固含量8%），過200目篩，放入攪拌子置于磁力攪拌器上攪拌45 min，采用小型包衣鍋進(jìn)行包衣（片床溫度控制在40 ℃，包衣鍋的轉(zhuǎn)速為30 r•min-1，包衣液流速為0.5 mL•min-1），包衣增重控制在3%，包衣結(jié)束后在包衣鍋內(nèi)40 ℃陳化30 min，即得自制品。

    3 處方優(yōu)化 
    3.1 中心復(fù)合設(shè)計 
    從單因素試驗中發(fā)現(xiàn)不同崩解劑對藥物的溶出影響較大，CMS-Na為崩解劑時自制品的溶出和上市品相似，為進(jìn)一步考察崩解劑用量的影響，將CMS-Na用量作為中心復(fù)合設(shè)計的因素之一。在單因素試驗中，CMS-Na 用量為12%，而CMS-Na常用量范圍為1%~8%，設(shè)計CMS-Na 量的范圍為6 ~12%。在單因素試驗中，未考察硬度的影響，而理論上硬度對片劑溶出度有直接的影響，故將其直接作為中心復(fù)合設(shè)計的因素之一。測定上市品倍博特®的硬度為9~13 kg（包衣片），素片包衣后，其硬度可達(dá)9~12 kg，故素片的硬度選擇低于包衣片，設(shè)計素片硬度范圍為5~9 kg。
使用Design Expert 7軟件進(jìn)行小中心復(fù)合實驗設(shè)計對復(fù)方纈沙坦苯磺酸氨氯地平片處方工藝進(jìn)行優(yōu)化，選取CMS-Na用量和片劑硬度為因素，因素水平表見表1。以自制品和上市品中2種藥物溶出曲線的相似因子f 2值為評價指標(biāo)，考察2個因素的影響。各個處方CMS-Na用量和硬度見表2，參見上述制備方法，壓片時硬度控制在設(shè)定的值。 
    3.2 處方重現(xiàn)性考察
依據(jù)優(yōu)化后的處方和工藝進(jìn)行實驗重現(xiàn)，制備3 批，每批200片，參考纈沙坦氨氯地平片（I） 進(jìn)口藥品注冊標(biāo)準(zhǔn)（JX20080182）和2010年版《中華人民共和國藥典》，考察自制品的硬度、溶出、脆碎度和含量均勻度。

    4 溶出度測定 
    4. 1 溶出方法
根據(jù)《中華人民共和國藥典》2010年版溶出度項下槳法，取各處方自制品與市售品，以0.1% 聚山梨酯80的磷酸鹽緩沖液（pH 6.8）1000 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速65 r•min-1，溫度（37±0. 5） ℃，分別于5，10，15，30，45，60 min取樣10 mL（隨行向溶出杯中補充等量同溫新鮮溶出介質(zhì)）。樣液經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，取5 mL續(xù)濾液于10 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，作為供試液，20 μL進(jìn)樣，按外標(biāo)法計算氨氯地平和纈沙坦的累積溶出百分率。 
    4.2 分析方法的建立 
    4.2.1 色譜條件 依據(jù)纈沙坦氨氯地平片（I）進(jìn)口藥品注冊標(biāo)準(zhǔn)（JX20080182），用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相為乙腈-水-三氟乙酸（400：600：2）；流速為1.2 mL•min-1，檢測波長為230 nm，柱溫為40 ℃。 
    4.2.2 對照品溶液的配制 依據(jù)纈沙坦氨氯地平片（I）進(jìn)口藥品注冊標(biāo)準(zhǔn)（JX20080182）中溶出度的測定方法，取苯磺酸氨氯地平對照品17.3 mg，精密稱定，置500 mL量瓶中，加甲醇20 mL使溶解，用溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，作為氨氯地平貯備液；精密稱取纈沙坦對照品20 mg，置500 mL量瓶中，加甲醇10 mL使溶解，精密加入氨氯地平貯備液50 mL，用溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。 
    4.2.3 分析方法專屬性考察 稱取4 mg按處方比例混勻的輔料至50 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲15 min，用溶出介質(zhì)稀釋至刻度，過0. 45 μm濾膜，取1 mL續(xù)濾液稀釋至10 mL，作為空白輔料溶液。分別稱取6.92 mg 苯磺酸氨氯地平和80 mg纈沙坦到10 mL量瓶中，用適量甲醇溶解后，用溶出介質(zhì)稀釋至刻度，作為苯磺酸氨氯地平溶液和纈沙坦溶液。取空白輔料溶液、苯磺酸氨氯地平溶液和纈沙坦溶液各20 μL進(jìn)樣，記錄色譜圖，考察在此液相條件下輔料對兩藥以及兩藥間相互干擾情況。 
    4.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取6.92 mg苯磺酸氨氯地平對照品至100 mL量瓶中，用5 mL甲醇溶解，再用溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻。精密稱量8 mg纈沙坦對照品到50 mL量瓶，用2 mL甲醇溶解后，精密加入10 mL苯磺酸氨氯地平溶液，稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。精密移取1，2，3，4，5，6 mL貯備液稀釋至10 mL，配成一系列標(biāo)準(zhǔn)液。20 μL進(jìn)樣，記錄色譜圖，分別以苯磺酸氨氯地平和纈沙坦的峰面積（A）對質(zhì)量濃度（C，μg•mL -1）進(jìn)行線性回歸。 
    4.2.5 溶液穩(wěn)定性考察 取標(biāo)準(zhǔn)曲線項下溶液，分別于0，2，4，6，8 h進(jìn)樣20 μL，記錄圖譜，分別計算兩藥峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。 
    4.2.6 精密度考察 取標(biāo)準(zhǔn)曲線項下貯備液1，3，5 mL至10 mL量瓶，配成低、中、高3 種溶液，20 μL進(jìn)樣，分別同一天連續(xù)測5 次及連續(xù)5 d分別測定兩藥的峰面積，分別計算兩藥的日內(nèi)、日間精密度。 
    4.2.7 回收率考察 分別稱取9 份處方量空白輔料至100 mL量瓶中，分別加入處方量的80%，
100%，120%藥物各3份，先用15 mL的甲醇溶解后，加入溶出介質(zhì)稀釋至刻度，超聲15 min，過0.45 μm濾膜，取1 mL續(xù)濾液稀釋至10 mL，搖勻后移取5 mL稀釋至10 mL，即得低、中、高3種溶液各3 份，20 μL進(jìn)樣，記錄色譜圖，計算苯磺酸氨氯地平和纈沙坦的回收率。 
    4.3 自制品和上市品在不同pH溶出介質(zhì)的溶出曲線比較
根據(jù)《中華人民共和國藥典》2010年版溶出度項下槳法，取各處方自制品與市售品，以pH 1.2鹽酸（或pH 4.5的乙酸緩沖液）1000 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速65 r•min-1，溫度（37±0.5）℃，分別于5， 10，15，30，45，60，90，120 min（或5，10，15，30，45，60，90，120，180，240 min）取樣10 mL（隨行向溶出杯中補充等量同溫新鮮溶出介質(zhì)）。樣液經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，取5 mL續(xù)濾液于10 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，作為供試液，20 μL進(jìn)樣，按外標(biāo)法計算氨氯地平和纈沙坦的累積溶出百分率。
通過相似因子f 2值計算，比較自制品和上市品的體外溶出行為，以累積溶出百分率達(dá)85%的時間點為T，分別各取0~1/4T，1/4T~1/2T和1/2T~3/4T 中一個點以及T，共4個點計算溶出度相似因子f 2值。

    結(jié)果與討論 
    1 處方和工藝單因素對溶出的影響 
    1.1 填充劑的影響 
    比較自制片和市售片溶出曲線發(fā)現(xiàn)，以預(yù)膠化淀粉和乳糖為填充劑時，纈沙坦和苯磺酸氨氯地平30 min均溶出80%以上，符合進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)要求的30 min溶出限度（Q）的要求（標(biāo)示量的75%），以MCC為填充劑時，兩藥30 min溶出均小于75%。而計算3個處方自制品的f 2值均未達(dá)50，以預(yù)膠化淀粉為填充劑的自制品f 2值最高，故填充劑選擇為預(yù)膠化淀粉。 
    1.2 崩解劑的影響 
    比較溶出曲線可知，以CMS-Na和CCNa為崩解劑時，兩藥30 min溶出均＞85%，且f 2值接近50，而以L-HPC和PVPP為崩解劑時，兩藥30 min溶出均＜75%，考慮CCNa為進(jìn)口輔料，故選擇國產(chǎn)CMS-Na為崩解劑。 
    1.3 黏合劑的影響 
    比較自制片和市售片溶出曲線發(fā)現(xiàn)，以PVPK30的醇溶液為黏合劑時，粉末成團(tuán)，無法制粒。通過試驗研究發(fā)現(xiàn)，乙醇誘導(dǎo)了纈沙坦的黏性，使得粉末成團(tuán)。以3% PVP-K30水溶液和3% HPMC為黏合劑時，兩藥30 min溶出均達(dá)90%以上，以10%淀粉漿為黏合劑則溶出不合格。考慮到HPMC的黏性較大可能對溶出不利，選擇3% PVP-K30水溶液為黏合劑。由于不同黏合劑用量會導(dǎo)致顆粒過硬、結(jié)塊等，影響崩解和溶出度，PVP-K30的常用量為2%~20%，故比較2%和3%PVP-K30為黏合劑的處方溶出曲線，發(fā)現(xiàn)兩藥30 min溶出均達(dá)90%以上，無顯著性差別，故仍采用3%的PVP-K30水溶液為黏合劑。 
    1.4 潤滑劑和助流劑的影響 
    比較自制片和上市品溶出曲線發(fā)現(xiàn)，不加微粉硅膠自制品的兩藥30 min溶出達(dá)不到進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)要求（標(biāo)示量的75%）。微粉硅膠屬于水不溶性的，但其親水性很好，且吸附能力強，能吸附大量藥物，降低了藥物粒子間的吸附功能，避免了某些細(xì)小粉末狀藥物的附聚與結(jié)塊，促進(jìn)了藥物的溶解與溶出。以不同方式加入硬脂酸鎂的自制品，兩藥30 min溶出均＞85%，故選擇常規(guī)外加1.8%硬脂酸鎂為潤滑劑。 
    1.5 烘干時間和溫度對顆粒水分的影響
水分測定發(fā)現(xiàn)，40 ℃烘干均需19 h 水分＜3%，60 ℃均需2~4 h水分＜3%，則選擇烘干條件為60 ℃，2~4 h。

    2 中心復(fù)合設(shè)計處方工藝優(yōu)化 
    采用優(yōu)化處方（34.3%預(yù)膠化淀粉為填充劑，10%CMS-Na為崩解劑，3%PVP水溶液為黏合劑，0.9%微粉硅膠為助流劑，1.8%硬脂酸鎂為潤滑劑，素片硬度50 N）制備的3批自制品，苯磺酸氨氯地平的f 2值分別為92.65，64.39，58.52；纈沙坦的f 2值分別為74.68，93.90，85.22； 由于小試工藝不穩(wěn)定等原因?qū)е?批f 2值相差較大，但均＞50，說明3批自制品和上市品的溶出曲線相似。測量3批自制品的硬度（包衣片）為9~11 kg，9~11 kg，9~12 kg，和上市品倍博特®®接近； 3批自制品的碎脆度為0.03%，0.01%和0.01%，均＜1%且未檢出斷裂、龜裂及粉碎的片，符合《中華人民共和國藥典》2010年版要求；而測定片劑中兩種藥物的含量均勻度發(fā)現(xiàn)，兩種藥物的A + 1.80S均＜10，也符合《中華人民共和國藥典》2010年版中固體制劑的含量均勻度要求。 
   

    3 溶出度分析方法 
    3.1 色譜系統(tǒng)適用性 
    氨氯地平峰與纈沙坦峰的分離度均＞2.0；拖尾因子均＜2.0；對照品溶液進(jìn)樣5針，RSD分別為0.24%和0.11%，均符合要求。 
    3.2 專屬性 
    結(jié)果表明，在該色譜條件下，空白輔料對兩種藥物的測定均未見干擾.

    3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線 
    以峰面積（A）對質(zhì)量濃度（C，μg•mL-1）進(jìn)行線性回歸，在16~96 μg•mL-1范圍內(nèi)，纈沙坦的回歸方程為A = 53098C-2203.4（r = 0.9999）；在1.384~8.304 μg•mL-1范圍內(nèi)，苯磺酸氨氯地平的回歸方程為A = 32769C-258.20（r = 0.9995），表明兩藥濃度和峰面積均呈良好的線性關(guān)系。 
    3.4 溶液穩(wěn)定性、精密度與回收率 
    纈沙坦和苯磺酸氨氯地平溶液在0，2，4，6，8 h測得的峰面積的RSD分別為0.29% 和1.16%，說明溶出度測定溶液至少在8 h內(nèi)穩(wěn)定。苯磺酸氨氯地平和纈沙坦的低、中、高3個濃度的日內(nèi)、日間RSD和回收率RSD均＜2%，方法可靠。 
   

    4 自制品和上市品的溶出比較 
    通過比較自制品和上市品在標(biāo)準(zhǔn)介質(zhì)0.1%聚山梨酯80-pH 6.8磷酸緩沖液中的溶出曲線，計算相似因子f 2值，苯磺酸氨氯地平和纈沙坦的f 2值分別為68.72 和95.19，說明了自制品和上市品在標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的溶出介質(zhì)中體外溶出行為相似。同時比較了自制品和上市品在pH 1.2鹽酸和pH 4.5乙酸緩沖液中的溶出，計算相似因子f 2值，在pH 1.2鹽酸溶出介質(zhì)中苯磺酸氨氯地平和纈沙坦的f 2值分別為56.14和59.17；在pH 4.5乙酸緩沖液中兩者的f 2值分別為55.83 和56.32，f 2值均＞50，說明自制品和上市品的體外溶出相似。    

   

     5 結(jié)論 
    本研究進(jìn)行了纈沙坦苯磺酸氨氯地平復(fù)方片的處方篩選和優(yōu)化，采用濕法制粒成功制備出具有和上市品相似體外溶出的片劑，符合纈沙坦氨氯地平片（I）進(jìn)口藥品注冊標(biāo)準(zhǔn)（JX20080182）中溶出度要求以及《中華人民共和國藥典》2010年版中片劑的相關(guān)要求，同時對溶出度測定進(jìn)行了方法學(xué)考察。 
    上市品及相關(guān)專利不用濕法制粒主要原因可能是氨氯地平可能遇濕不穩(wěn)定，但影響因素試驗和加速試驗（3個月）均未見含量降低和有關(guān)物質(zhì)升高（數(shù)據(jù)未公開），雖然小試未發(fā)現(xiàn)含量降低和有關(guān)物質(zhì)升高，但在大批量生產(chǎn)時的適應(yīng)性還有待評估。本品輔料均為國產(chǎn)輔料，工藝簡單，成本較低，可望降低患者的治療費用。

    來源：《中國新藥雜志》2012年第21卷第15期益氣復(fù)脈治療冠心病心力衰竭合并心絞痛的療效觀察 作者：袁長玲，杜壽龍

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